荧光探针的合成及表征

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以罗丹明B为原料设计合成了一系列的烷基罗丹明B酯衍生物。优化得到了适宜的工艺条件。以SOCl2为酰基化试剂,罗丹明B与醇的摩尔比为1:10,反应温度70°C,反应时间7h,罗丹明B酯衍生物的收率可达80%以上。荧光性能分析结果表明,烷基罗丹明B酯的烷基结构对其荧光强度、最大吸收和发射波长影响不大。甲基罗丹明B酯最大吸收和发射波长不受浓度的影响,荧光强度随浓度增加而增加;随着溶剂极性的增加,其最大吸收、发射波长红移,而荧光强度降低;随着激发光照射时间的增长,其最大吸收和发射波长无变化,但荧光强度明显降低,且在极性溶剂中降幅大于其在非极性溶剂中。合成了硝基罗丹明B、氨基罗丹明B及卤代罗单明B。硝基罗丹明B与罗丹明B相比荧光强度减弱,最大吸收和发射波长红移。氨基罗丹明B与罗丹明B相比,荧光强度增强,最大吸收和发射波长红移。随着溶剂极性的增加,硝基罗丹明B和氨基罗丹明B的最大吸收和发射波长略向红移,而荧光强度降低。单卤代后罗丹明B与罗丹明B相比,荧光强度增大,最大吸收和发射波长红移,其荧光强度的顺序为I<Br<Cl<F,其最大吸收和发射波长顺序为I<Br<Cl<F。四氟罗丹明B和四氯罗丹明两者的最大吸收和发射波长较接近,但都比相对应的单卤代罗单明B要有明显的红移。四氯罗丹明B荧光强度要小于四氟罗丹明B,与对应的单卤代罗丹明B相比都有明显的降低。建立了长链羧酸荧光素酯合成工艺路线,合成了一系列荧光素酯。对系列荧光素酯水解性能的研究表明,碳链越长的羧酸荧光素酯其自然水解就越难发生,稳定性能就越好。随着荧光素酯中羧基碳链的增长,脂酶检测的灵敏度有了进一步提高。筛选得到了研究脂酶的理想荧光探针二(十二酸)荧光素酯,用其可以检测0.1微克/毫升的脂酶的活性。以氨基罗丹明B和氨基荧光素为原料,采用草酰氯单乙酯作为连接剂,合成了具有双发色基团的新化合物RH-F。该物质在紫外可见吸收光谱上出现两个吸收峰,分别接近于氨基荧光素及氨基罗丹明B。将甲基罗丹明B酯和RHB-F分别应用于测定DNA浓度,优化了分析条件,建立了共振光散射法测定痕量DNA的测定方法。
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