长白瑞香抗弓形虫的药效物质及其质量标准研究

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目的:对长白瑞香抗弓形虫的药效物质及质量标准进行研究。方法:采用最大耐受量法测定小鼠口服长白瑞香总提取物的急性毒性。采用四唑盐(MTT)比色法测定长白瑞香总提取物及4个萃取物体外抗弓形虫作用,筛选出长白瑞香活性部位。运用多种色谱分离技术(正、反相硅胶柱色谱,制备型高效液相等)对长白瑞香二氯甲烷萃取物进行分离纯化。通过挥发性成分GC-MS分析、含量测定对长白瑞香药材进行定性、定量研究,建立长白瑞香质量标准研究方法。对抗弓形虫药效物质进行体外抗弓形虫作用研究,最终利用Schrodinger中的GLide软件,结合有机小分子生物活性数据库(PubChem)和PDB晶体数据库,实现高通量分子对接,以优选活性成分。结果:在观察期14d内,高(10g/kg)、低(5g/kg)剂量组均未见小鼠死亡,且小鼠体重和主要脏器无变化;长白瑞香总提取物对小鼠的半数致死量为(LD50)大于10 g/(kg·BW),属实际无毒。体外抗弓形虫实验结果中乙酸乙酯萃取物和二氯甲烷萃取物的效果较明显,二者对感染弓形虫前后的Hela细胞的IC50分别为 298.7 μg/mL、208.2 μg/mL 和 298.6μg/mL、206.1 μg/mL,选择性指数SI均为1.4。从二氯甲烷萃取物中分离得到5个化合物,经波谱分析鉴定分别为:柚皮素(1),瑞香素(2),伞形花内酯(3),紫丁香苷(4),瑞香苷(5)。长白瑞香不同药用部位中除瑞香素含量差异明显外,其他4种化合物含量分布较为均匀。长白瑞香挥发性成分的提取率为0.56%,从分离出的76个色谱峰中共鉴定出51个成分,占挥发性成分总量的95.22%。化合物体外抗弓形虫作用结合分子对接结果显示长白瑞香二氯甲烷萃取物中,紫丁香苷抗弓形虫作用效果较明显。结论:本项研究证实长白瑞香提取物口服给药安全性较高。初步评价长白瑞香抗弓形虫最优药效物质为紫丁香苷,该结果可为进一步研究长白瑞香抗弓形虫的物质基础提供理论依据。同时建立了长白瑞香质量标准研究方法,其结果可为长白瑞香的质量标准提供参考依据。
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