细菌感染导致的病症主要有呼吸道感染,皮肤感染、消化道感染、血液感染、泌尿系统感染,不断的威胁着人类的健康,是导致全球范围内人类死亡的主要因素之一。如果细菌入侵到全身引发感染,特别是老人、婴幼儿、孕妇和抵抗力低下者,可能发展为菌血症、败血症、脓毒血症甚至会引起休克[1]。而抗生素的发现导致由细菌感染造成的疾病发病率和死亡率大幅度下降,成为医治由细菌感染引起的症状疗效较好的药物[2]。但是抗生素的滥用和使用不当易导致“超级感染”,如抗药性金黄葡萄球菌感染等[3]。精油成分复杂但一般以萜、醇、酮、醛、酯等小分子化合物形式存在,极易渗透皮肤屏障而被吸收进入到血液、淋巴等循坏系统,达到抗肿瘤、抗病毒、安神镇静、抗氧化、抗菌消炎、调节免疫等作用[4]。中药精油主要通过降解细胞壁、破坏膜功能、干扰物质运输,引发一系列反应致使细菌代谢失衡死亡而发挥抗菌作用,但是中药精油存在刺激性、光毒性、致敏性等安全性问题,同时存在稳定性差、挥发性强等质量问题。运用微乳技术将中药精油吸附或封装于载体材料中,可改善精油暴露于紫外线、氧气、高温及潮湿环境下的稳定性,减少氧化降解等化学反应。此外,该技术还可以延缓精油的挥发,并延长其有效作用时间[5]。医院里常用的化学消毒液,如新洁儿灭、75%酒精、过氧化氢、84消毒液、碘酒等以及采用紫外线照射、高压灭菌等物理方法进行消毒。这些方法虽能杀灭致病菌,作用时间短,有效浓度低,获得了良好的灭菌效果,但仍存在一定的不足,如存在毒性、刺激性、化学残留、腐蚀性、持续效果差等问题,并且在一定程度上对人体造成危害,如紫外照射不宜在有人环境下使用[6]。而近年来,中药消毒产品在消毒学领域取得新成就,将植物精油使用新型技术应用于抑菌剂不仅开辟了中药药源新用途,还扩大了中药的应用范围。这类抑菌剂取材天然、价格低廉、气味芬芳、毒副作用小[7,8]。某些中药化学成分具有多靶点作用及较好的体外抗菌抗病毒作用,可有效抑制病源复制、阻断感染源传播,可广泛应用于临床。山蜡梅被誉为江西四大著名药材,江西民间早在北宋时期就有使用山蜡梅叶泡茶治疗和预防感冒的习惯,距今有近1000年的历史。在浙皖赣交界的国家级“生态文化旅游县”婺源境内拥有丰富独特的山蜡梅资源。山蜡梅叶成分主要以挥发油为主[9],具有抗菌、抗癌的生理活性,目前对该精油的化学成分和药理活性研究较多,但是对其制剂领域的研究较少。鉴于此,本文制备了以微乳为载体的山蜡梅叶挥发油抑菌喷雾剂,通过高效液相色谱法（High performance liquid chromatography,HPLC）建立了山蜡梅叶挥发油的芳樟醇-桉叶油醇双成分含量测定,并确定了抑菌喷雾剂的处方以及制备工艺,对该喷雾剂进行了质量评价、稳定性评价、抑菌活性评价和安全性评价,为该抑菌喷雾剂的产业化应用提供了有效的实验依据。1.山蜡梅叶挥发油HPLC方法的建立通过HPLC建立山蜡梅叶挥发油中有效成分芳樟醇-桉叶油醇含量测定方法,对两种有效成分含量进行了方法学考察。结果表明样品中芳樟醇和桉叶油醇色谱峰的分离度大于1.5,理论塔板数大于7000,专属性良好;芳樟醇和桉叶油醇分别在0.0630～0.6300mg·m L-1、0.6014～6.0140mg·m L-1浓度范围内具有较好的线性关系;精密度实验中芳樟醇和桉叶油醇的相对标准偏差（Relative Standard Deviation,RSD）分别为0.2665%、0.4293%,表明该仪器精密度良好;重复性实验中芳樟醇和桉叶油醇的RSD值分别为0.2861%、0.2304%,表明该方法重复性良好;稳定性实验中芳樟醇和桉叶油醇的RSD值分别为0.3309%、0.2946%,表明山蜡梅叶挥发油供试品在24 h内稳定;加样回收率均在95%～105%之间,RSD值分别为1.5750%、0.8136%;芳樟醇和桉叶油醇的平均含量分别为0.3355mg·m L-1、3.2658 mg·m L-1。综上所述,该方法可靠、稳定,可以作为抑菌喷雾剂中测定挥发油含量的质量分析方法,而芳樟醇和桉叶油醇可以作为山蜡梅叶挥发油抑菌喷雾剂的质量控制指标。2.山蜡梅叶挥发油抑菌喷雾剂的制备工艺研究以蓖麻油聚氧乙烯醚（Polyoxyl 35 castor oil,CEL-35）为表面活性剂,无水乙醇为助表面活性剂,采用水滴定法制备山蜡梅叶挥发油抑菌喷雾剂。通过单因素实验,选择油相占比、Km值、Smix/O作为后续Box-Behnken响应面试验考察因素,以平均粒径、PDI和两种有效成分芳樟醇、桉叶油醇载药量的综合评分作为评价指标,设计三因素三水平的响应面试验对抑菌喷雾剂处方进行优化。结果表明山蜡梅叶挥发油抑菌喷雾剂最优处方为油相7.08%、乙醇3.84%、CEL-35为13.57%、水75.51%,搅拌速度为400 r/min,搅拌时间为15 min,搅拌温度为常温,加入顺序为表面活性剂与油相混合均匀后,加入助表面活性剂进行搅拌混匀,然后缓慢加入水相,即得山蜡梅叶挥发油抑菌喷雾剂。3.山蜡梅叶挥发油抑菌喷雾剂的质量评价与稳定性最佳处方工艺下制备的抑菌喷雾剂呈澄清透明状,并根据染色法和电导率法鉴别该体系为O/W型微乳。透射电镜（Transmission Electron Microscope,TEM）结果显示该制剂呈类球状,颗粒之间无粘连;粒径为21.78±0.15 nm,其PDI为0.155±0.002,p H为5.77±0.03,呈弱酸性。其中抑菌喷雾剂中的芳樟醇和桉叶油醇含量分别为0.463±0.0055%、5.782±0.1996%。每瓶总喷次在150次左右,每喷喷量在180～190 mg之间,每喷主药含量为7.5315 mg。FTIR（Fourier transform infrared）的结果表明山蜡梅叶挥发油已被成功包埋于微乳载体中;通过对重金属铅砷汞的检测,该抑菌喷雾剂达到皮肤消毒剂标准中规定的重金属含量检出要求。该抑菌喷雾剂在高速离心和高湿环境下均具有良好的稳定性;储存稳定性表明该制剂应于阴凉处避光保存。加速稳定性结果表明该喷雾剂具有2年的有效期。4.山蜡梅叶挥发油抑菌喷雾剂微生物指标测定与抑菌效果评价通过平板计数法测定微生物指标,抑菌喷雾剂中细菌菌落总数和真菌菌落总数均为0,同时未检出大肠杆菌、三种致病性化脓菌和白色念珠菌的存在。还通过倍数稀释法和平板计数法配合使用,测定抑菌喷雾剂对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的抑菌率分别为99.78%、98.67%、99.61%,表明抑菌喷雾剂有较强地抑制金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌的作用。5.山蜡梅叶挥发油抑菌喷雾剂的初步安全性评价本文根据中药、天然药物免疫毒性（过敏性、光变态反应）研究技术指导原则和中药、天然药物局部刺激性和溶血性研究技术指导原则对抑菌喷雾剂进行了皮肤刺激性和过敏性实验,结果表明抑菌喷雾剂对皮肤无刺激性、无过敏性,安全性较高。这为抑菌喷雾剂的产业化应用奠定了坚实的基础。