膀胱癌是我国泌尿系统中最常见的恶性肿瘤,具有高复发率及复发后肿瘤级别进展的特性,超过70%的患者在接受膀胱镜下肿瘤切除术后2年内出现复发转移,且其临床分期及病理级别出现进展。因此,临床上针对膀胱癌术后患者需进行密切的随访复查及辅助治疗。然而目前仍缺乏敏感特异的膀胱癌分子标志物及治疗靶点,进一步筛查和鉴定新型膀胱癌诊断与监测分子标志物及治疗靶点,并建立其国人膀胱癌预后预测及肿瘤监测分子标志物体系,对改善膀胱癌患者的预后具有重要意义。第一部分基于蛋白质组学技术筛选的CRABP2与FABP5蛋白质分子是膀胱癌新型的潜在性肿瘤标志物。目的：膀胱癌目前仍缺乏敏感特异的诊断与术后随访监测分子标志物。应用蛋白质组学技术筛选及鉴定肿瘤分子标志物是热门且有效的方法。本研究旨在运用双向荧光差异凝胶电泳(2D-DIGE)联合基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱(MALDI-TOF/TOF MS)筛选及鉴定国人膀胱癌新型的敏感特异性分子标志物。方法：随机选取3例病理诊断为膀胱尿路上皮癌的肿瘤组织标本及配对的癌旁正常膀胱粘膜标本,将提取的组织蛋白用Cy2, Cy3与Cy5荧光标记后进行2D-DIGE,获得二维蛋白质点图谱并进行差异分析。选取在3对组织标本均存在显著差异表达的蛋白质点用于MALDI-TOF/TOF MS分析,筛选出新型的潜在性膀胱癌分子标志物。然后在32例膀胱尿路上皮癌组织标本中应用蛋白质印迹方法(Western Blot)进行验证及分析。结果：通过对2D-DIGE获得的二维蛋白质点图谱进行差异分析,共发现71个蛋白质点均在3例膀胱尿路上皮癌的肿瘤组织及配对癌旁正常粘膜组织中存在显著差异性表达,其中63个蛋白质点采用MALDI-TOF/TOF MS分析并成功鉴定。发现有21种蛋白质分子在膀胱癌组织中显著异常高表达,其中有两个蛋白质点鉴定为CRABP2与FABP5。通过在32例膀胱癌组织标本中进行验证分析,发现CRABP2与FABP5两种蛋白质分子在肿瘤标本中均为显著异常高表达。结论：CRABP2与FABP5在膀胱癌中异常高表达,是国人膀胱癌新型的潜在性肿瘤标志物。第二部分线粒体融合蛋白2在膀胱癌中的抗肿瘤作用及其机制研究目的：Mfn2基因通过腺病毒介导转染在肺癌细胞株A548和结肠癌细胞株HT-29中高表达具有显著的抗肿瘤作用,但其在膀胱癌中的作用仍未明确。本实验通过研究高表达的Mfn2对膀胱癌T24和5637细胞生长的作用,阐明Mfn2在膀胱癌中的抗肿瘤作用及其机制。方法：采用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-PCR, RT-PCR)和免疫印迹方法(western blot analysis)检测36对膀胱癌组织和相应癌旁正常组织标本中Mfn2的表达。通过含有完整Mfn2基因的腺病毒载体(Ad-Mfn2)将Mfn2基因转染至膀胱癌细胞内,以含编码绿色荧光蛋白的基因的腺病毒载体(Ad-GFP)作为对照,运用RT-PCR、免疫印迹、流式细胞术等方法观察Mfn2表达情况、细胞周期分布以及与细胞周期及凋亡相关蛋白的表达情况。结果：研究发现,Mfn2蛋白在膀胱癌组织中的表达量显著低于癌旁正常组织。Ad-Mfn2具有显著抑制T24和5637细胞增殖的作用。高表达Mfn2的T24细胞其细胞周期明显阻滞于G0/G1期,并通过激活caspase-3和PARP引起细胞凋亡,同时引起周期相关蛋白p21和p27表达上调,PCNA表达下调。结论：Mfn2是膀胱癌的一个潜在抑癌基因,其蛋白在癌组织中显著低表达,同时可促进膀胱癌细胞凋亡并抑制肿瘤细胞的增殖。Mfn2有可能成为膀胱癌重要的治疗靶点。