【摘 要】
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目的:研究并探讨沉默Ebp1基因对肝癌细胞HepG2增殖、侵袭及转移能力的影响,为肿瘤的治疗、预后提供准确的预测,同时为肿瘤靶向药物靶点的选择提供新的思路。方法:1、应用免疫
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目的:研究并探讨沉默Ebp1基因对肝癌细胞HepG2增殖、侵袭及转移能力的影响,为肿瘤的治疗、预后提供准确的预测,同时为肿瘤靶向药物靶点的选择提供新的思路。方法:1、应用免疫组织化学染色检测60例肝癌组织及癌旁组织中Ebpl蛋白的表达情况。2、应用Western blot方法检测Ebp1蛋白在肝癌细胞株(Heq G2、Hep3B、Alexander、Huh7、SK-Hepl)中的表达,并最终筛选出HepG2作为慢病毒转染细胞。3、利用激光共聚焦显微镜观 GFP-Ebp1蛋白在HepG2肝癌细胞株的表达及定位。4、用慢病毒介导shRNA-Ebp1感染HepG2肝癌细胞并用嘌呤霉素筛选稳转细胞。5、运用Western blot检测慢病毒转染shRNA-Ebp1组和阴性对照组中Ebp1基因沉默效果6、采用CCK-8法检测阳性shRNA-Ebp1组、空白对照组和空质粒组的细胞增殖情况。7、应用Transwell侵袭实验检测沉默Ebp1基因后对肝癌细胞HepG2侵袭、迁移的影响。结果:1、Ebp1蛋白在肝癌组织中呈高表达,在癌旁组织及正常组织中低表达或不表达。2、Ebp1蛋白在肝癌细胞株中呈高表达,并且在HepG2肝癌细胞中的表达最高。3、GFP-Ebp1可在HepG2肝癌细胞中表达,并且表达部位主要位于细胞浆内,核内不或无表达。4、Western blot显示与空质粒对照组相比,shRNA-Ebp1组中Ebp1蛋白的表达被抑制。5、CCK8实验显示阳性(shRNA-Ebp1)组与空白对照组和阴性对照组相比,shRNA-Ebp1组细胞增殖明显降低(P<0.05)。6、Transwell实验显示,shRNA-Ebp1组与空质粒组相比其细胞迁移、侵袭能力减弱(P<0.05)。结论:用慢病毒靶向沉默Ebp1基因表达可以降低其侵袭能力,这一发现将为寻找抑制肝癌侵袭转移的分子靶点提供新的思路
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