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目的:肺癌表皮生长因子受体(EGFR)基因外显子19的多种缺失、外显子20的突变及外显子21的L858R点等30多种基因位点突变;直肠癌K-ras基因密码子12，13上的不同位点碱基突变等，与靶向药物治疗密切相关。实现肺癌和肠癌个体化医疗的前提是准确获得EGFR和K-ras基因突变的信息。本研究目的是探索肺癌表皮生长因子受体(EGFR)基因及直肠癌K-ras基因突变个体化医疗临床基因检测的方法，评价SangerDNA测序法和ARMS法的特异性、敏感性、检出率和局限性，不同临床背景标本的适用性;分析石蜡包埋标本处理过程对标本DNA的影响因素，特别是对恶性的胸水标本检测影响因素进行探讨，试图建立一种规范的胸水标本药靶基因检测流程，为临床提供合适的药靶基因检测平台。检测临床标本58例，了解该两个基因的突变情况，为药物疗效观察提供理论依据。 方法:收集临床肿瘤样品58例，其中肠癌样品24例（石蜡包埋切片组织22例、新鲜组织2例），肺癌样品34例（石蜡包埋切片组织20例、穿刺标本4例、恶性胸水10例）。按标本类型不同分三组进行DNA提取，组1石蜡标本，镜下估算肿瘤细胞丰度，刮取确定丰度区域，脱蜡，DNA提取，DNA含量测定。组2活检穿刺组织，蛋白酶K消化，DNA提取，DNA含量测定，无法估算肿瘤细胞丰度。组3胸水标本，肝素抗凝，处理方法一，Ficoll分离液分离单个核细胞，涂片估算肿瘤细胞丰度，刮取确定丰度区域，提取DNA。方法二，直接离心，沉淀物直接裂解提取DNA。用Sanger DNA测序法和ARMS法两种技术检测上述标本EGFR基因或K-ras基因，获取基因突变信息。用肿瘤细胞株提取DNA，梯度稀释DNA，代表不同肿瘤细胞丰度，检测两种方法灵敏度和特异性。选取一已知突变的胸水标本，梯度离心涂片刮片浓缩肿瘤细胞，提取肿瘤细胞DNA并测定含量;再用非肿瘤患者胸水细胞DNA稀释调整肿瘤细胞DNA丰度0％、1％、10％、20％、30％、50％，用上述两种基因检测法检测，估算临床胸水标本突变检测最低下限，为实际应用和操作流程制定提供依据。 结果:Sanger DNA直接测序法检测58例标本，长片段引物扩增外显子，PCR成功率为56.9％，43.1％未获得检测结果。改用短片段引物扩增已知药靶相关位点，成功率为100％。24例肠癌标本，Sanger DNA直接测序法发现5例K-ras基因突变，突变率为20.8％;5例中3例为第12密码子第2位的GGT→GAT，1例为第13密码子第2位的GGC→GAC，1例为第12密码子第1位的GGT→CGT。34例肺癌标本，直接测序法发现7例EGFR基因突变，突变率为20.6％。主要分布在19号外显子、21外显子和20号外显子，18外显子未见突变。突变涉及位点有EGFR第19外显子框架内多核苷酸的缺失2236_2250del15、2239_2253del15、2240_2251del12; EGFR第21外显子2573G＞T点突变;EGFR第20外显子2361G＞A点突变。ARMS法对58例样本检测成功率为100％。其中24例肠癌标本，ADx-K-ras试剂盒检出突变9例，突变率为37.5％。5例同SangerDNA直接测序法检出突变一致，4例为新增检出突变。其中2例为第12密码子第2位的GGT→GAT，1例为第13密码子第2位的GGC→GAC，1例为第12密码子第2位的GGT→GTT。34例肺癌标本ADx-EGFR试剂盒，检出突变11例，突变率为32.4％，其中7例同Sanger DNA直接测序法检出突变一致，4例为新增检出突变。其中1例为第19外显子2238_2255del18缺失、1例为第21外显子2573T＞G点突变，第18外显子2例为携带双突变(19-del、2155G＞A/2155G＞T)和2156G＞C突变。灵敏度检测结果显示，ARMS法为0.5ng/ul肿瘤DNA，Sanger法为5ng/ul肿瘤DNA。ARMS法灵敏度为Sanger法10倍。两种方法检测0％、1％、10％、20％、30％、50％肿瘤细胞DNA/非肿瘤细胞DNA的丰度阳性突变的肺癌胸水，ARMS法检测敏感性为10％的丰度，Sanger DNA直接测序法为30％;两种方法特异性均为100％。肿瘤细胞的丰度、石蜡标本DNA降解和PCR引物长度是影响测序结果的重要因素，改良后恶性胸水标本处理法可提高突变检出率。ARMS法比SangerDNA直接测序法检测突变灵敏度高。 结论:ARMS法对样本中DNA质量的耐受性较好，检测突变率高于Sanger DNA直接测序法，特别适用于胸水或穿刺等肿瘤细胞丰度很低的标本，但ARMS法只对已明确的突变位点，适合临床应用，不适用于流行病学调查和临床研究。经改良方法处理后恶性胸水提取肿瘤细胞纯度明显增高，使恶性胸水在临床上广泛用于药靶相关基因检测可行性大为提高。