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研究目的本研究旨在探讨胎盘支持造血的功能,并通过研究不同时期的胎盘组织体外对脐血造血干细胞扩增的作用,进一步了解随着胎龄的增长胎盘造血功能发生的变化。寻找出经济、适用性强的体外扩增造血干细胞的方法,如果实验证明胎盘无细胞悬液的体外支持扩增的能力,那么就可以变废为宝,在节约大量昂贵的细胞因子的前提下,进行有效的造血干细胞的扩增,并能够成功应用于临床。研究方法1.采集妊娠早期(6-8周)、中期(16-22周)、足月(满37周)胎盘绒毛组织,无菌条件下生理盐水反复冲洗绒毛组织并称重,每组各3份,磨碎后高速离心取上清,置-80度分装保存待用。2.应用淋巴细胞分离液分选出单个核细胞,通过流式细胞仪分选CD34+细胞。3.应用早期(B组)、中期(C组)和足月(D组)胎盘绒毛组织悬液,并设定空白对照(A组),以共培养的方式分4组进行体外扩增脐血造血干细胞并培养观察扩增后的集落形成能力。4.统计学分析：应用SPSS17.0统计学软件对所得资料进行统计分析,数据以x±s表示。应用单因素方差分析对数据进行处理,P<0.05为差异有统计学意义。结果1.CD34+-FITC上机分选,选出抓取标记细胞的范围p5,抓取范围内的细胞占总数的18.6%,此区域内(P5)CD34+细胞收集效率为95%,抓取获得细胞为6×105个,细胞纯度可达99%。2.共培养7天后以接种初浓度为对比,A组空白对照组细胞呈逐渐衰减趋势,B组扩增效果不明显,为1.40±0.20,C组和D组均能有效扩增造血干细胞,扩增倍数分别为2.93±0.50和4.80±0.40。3.各组培养7天后,流式细胞仪检测各组CD34+细胞平均阳性率,实验前混匀各孔细胞,各孔取部分细胞做流式检测,结果显示中期、足月组在培养后造血干细胞的阳性率维持较高水平,远强于空白对照组和早期实验组,中期阳性率最高为53.4%。4.集落培养14天后,结果显示C、D组集落形成总数明显高于A、B组,C组CFU-GM、CFU-GEMM、BFU-E集落数均略高于D组。结论1.在没有外源性细胞因子存在的情况下,不同时期的胎盘绒毛组织悬液均可以支持造血干细胞的体外扩增,且随着胎盘发育其支持造血的功能呈现不断增强的趋势。2.扩增后的造血干细胞的集落形成能力呈现先增强后减弱的现象,中期胎盘培养扩增后的干细胞集落形成能力最强,略强于足月期胎盘扩增后的造血干细胞。3.在胎儿发育的中后期胎盘的造血功能逐渐向促进干细胞分化成熟发展,但其促使造血细胞增殖的能力并未减弱。