大肠杆菌核糖体功能缺陷影响染色体复制起始

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本研究以大肠杆菌核糖体蛋白RpsF、RpsO、Sra及核糖体相关蛋白YfiA、RimJ、RMF、DbpA、HPF为研究对象,探索核糖体功能缺陷对染色体复制起始的影响。首先检测Δsra、ΔrpsF、ΔrpsO、ΔyfiA、ΔrimJ、ΔrmΔdbpA、Δhpf突变细胞的细胞周期参数,发现在ABTGcasa和LB培养基中都能引起染色体复制起始不同程度上的延迟,其中Δsra和ΔrimJ突变体的效果最为显著。其次,发现上述突变体的细胞大小与野生型细胞有差异。把上述8种单突变体分别引入到dnaB252和dnaC2突变体均不改变dnaB252和dnaC2的温度敏感性,说明这些蛋白不是通过与DnaB和DnaC相互作用来影响DNA复制起始。进一步分析发现,上述8个单突变体中单个细胞的总蛋白量与DnaA含量有改变。特别是Δsra和ΔrimJ突变体中单个细胞的总蛋白量与DnaA含量明显下降。  质粒pACYC177-sra和psra-gfp过表达Sra蛋白不能恢复Δsra突变表型,然而过表达的Sra蛋白能够提高单个细胞中的总蛋白量和DnaA蛋白,说明过表达的Sra蛋白对细胞中核糖体的功能有促进作用。此外,pACYC177-rimJ质粒不能恢复ΔrimJ突变表型,进一步分析发现pET28a-rimJ质粒未表达RimJ蛋白。  综上所述,核糖体蛋白RpsF、RpsO、Sra及核糖体相关蛋白YfiA、RimJ、RMF、DbpA、HPF影响核糖体功能,核糖体功能缺陷影响细胞总蛋白和DnaA蛋白合成。进而,DnaA影响复制起始。
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