蓝靛果鞣花酸分离纯化及对脂质过氧化作用的影响研究

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论文就蓝靛果中的鞣花酸进行了提取、分离纯化方法的研究,并对所得蓝靛果中的鞣花酸进行了高效液相色谱分析,对其在模拟肠胃液中降解情况及离体抗脂质过氧化活性进行了研究。主要研究结果如下:对蓝靛果中鞣花酸的提取工艺进行研究。采用了溶剂浸提法和超声波辅助提取法两种方法提取鞣花酸,通过比较对鞣花酸得率的影响,选取超声波辅助提取法的最优提取工艺作为提取蓝靛果中鞣花酸的最优提取工艺,即将蓝靛果粉与80%丙酮-水溶液混合,料液比1:33(g/mL),在超声温度51℃、超声时间54min条件下进行提取,蓝靛果中鞣花酸的得率为18.31mg/g。对蓝靛果中鞣花酸的分离纯化工艺进行了研究。从五种大孔树脂中选择HPD-600对鞣花酸粗提液进行了初次的分离纯化:静态吸附时间为6h,以50%乙醇溶液作为洗脱液,解吸时间为3h时最佳;样品浓度控制在2.5mg/mL,流速为3mL/min,进样体积为50mL,之后采用60%乙醇溶液进行洗脱时最佳,再用大孔树脂CG-161进行二次分离纯化:静态吸附时间为3.5h,25℃为最佳吸附温度,采用13%氢氧化钠-60%乙醇溶液为洗脱剂;最佳上样体积为40mL时,以40mL浓度为50%的洗脱液进行洗脱,洗脱流速为3mL/min时最佳。实验测定未纯化、初次纯化和二次纯化的鞣花酸纯度分别为35.26%、61.07%、80.18%,说明纯化具有显著作用。利用高效液相色谱仪对蓝靛果鞣花酸进行定性定量检测,通过与标准品HPLC色谱图对比,鞣花酸含量占80.07%,可以确定经过纯化的蓝靛果鞣花酸中的主要成分为鞣花酸。对蓝靛果纯化后的鞣花酸进行了体外模拟胃肠道消化模型实验和离体抗脂质过氧化实验的研究。实验结果表明鞣花酸的含量在经过胃部和肠道消化后均有显著的变化,分别提高了36.5%和36.87%,证明了蓝靛果会在胃肠道消化过程中被释放出更多的鞣花酸。离体抗脂质过氧化实验表明蓝靛果中鞣花酸对于自发和H2O2或Fe2+诱导的脂质过氧化均具有抑制作用,对小鼠肝组织匀浆自发脂质过氧化的抑制作用最为明显,并且蓝靛果鞣花酸纯化液的抗脂质过氧化活性强于粗提液,在一定的浓度范围内,抗脂质过氧化活性和鞣花酸的浓度呈现量效关系,当鞣花酸浓度为600μg/mL时,蓝靛果中鞣花酸的抗脂质过氧化活性最强,为83.59%。
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