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目的：随着各种各样转基因食品通过贸易大量进入国际市场，转基因食品的安全性受到人们日益关注，世界各国对转基因食品的安全性存在着较大的争议，欧盟、日本等地区已经制定了相关法规对转基因食品进行了严格的管理。以孟山都(Monsato)公司的专利基因-CP4EPSPS基因使用最为广泛，目前已广泛用于玉米、大豆、棉花等农作物。CP4 EPSPS基因来源于土壤农杆菌株系(Agrobacteriumsp)CP4株系，CP4 EPSPS基因编码CP4 EPSP合成酶，该酶对除草剂草甘膦有高抗性。本研究拟通过制备抗CP4-EPSPS蛋白的单克隆抗体，对抗体生物学特性进行鉴定，为国产EPSPS胶体金试纸条的研究创造条件，为建立快速特异检测转基因植物(GMO)的实验方法提供的工具。
方法：诱导表达含转基因大豆CP4-EPSPS基因的原核表达重组载体pQE30/CP4-EPSPS、pET32a(+)/CP4-EPSPS，并且采用了Ni<2+>-NTA树脂亲和层析纯化CP4-EPSPS蛋白，以SDS-PAGE进行初步鉴定，并以胶体金试纸条鉴定其免疫活性。以重组蛋白CP4-EPSPS免疫BALB/c小鼠，采用杂交瘤技术制备抗CP4-EPSPS的McAb，采用间接ELISA方法和Western blot进行McAb特异性鉴定；同时采用间接ELISA方法鉴定McAb的Ig亚类、效价及相对亲和力，并进行McAb抗原结合表位分析；并对杂交瘤细胞的染色体进行分析。
结果：重组蛋白CP4-EPSPS主要以包涵体表达，上清表达量极低，但胶体金试纸条检测发现上清中CP4-EPSPS蛋白抗原活性强，复性包涵体中CP4-EPSPS蛋白的抗原性远低于上清中CP4-EPSPS蛋白的抗原性。采用扩大培养量、缩小超声破碎重悬体积的方法，从上清中纯化CP4-EPSPS蛋白获得成功。通过杂交瘤技术成功获得两株可分泌特异性McAb的杂交瘤细胞Ⅲ5A3，Ⅲ13A2。其抗体亚类均为IgG1；腹水效价分别为1：10<6>和1：10<8>；相对亲和Ⅲ5A3在10<5>以上，Ⅲ13A2在10<6>以上。ELISA相加实验结果显示两株McAb识别相同或相近的抗原表位。Western bolt检测证明两株杂交瘤细胞所分泌的McAb特异性良好。
结论：成功地制备出抗CP4-EPSPS的两株McAb，为建立快速特异检测转基因植物(GMO)的实验方法提供了有力的工具。