猪链球菌2型的分离鉴定以及实验性感染猪链球菌2型的病理学研究

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猪链球菌(Streptococcus suis,SS)是一种能引起人、猪和其他动物感染、发病的重要致病菌。根据其荚膜多糖(CPS),将SS分为35个血清型,即1/2型和1~34型,其中猪链球菌2型是毒力最强、流行最广泛的血清型。2型猪链球菌可以引起猪发病,产生脑膜炎、关节炎、心内膜炎、肺炎和败血症等症状,其中以脑膜炎症状最为显著。我国于1998年、2005年分别在江苏省和四川省部分地区的猪群中暴发该病,并引起了人的感染和死亡。该病不仅给养猪业造成严重的经济损失,而且给公共卫生和食品安全造成严重威胁,已经成为全球性的人畜共患病,并引起很多国家的高度重视。我国对该病的研究热点主要集中在流行病学调查、病原性分析、疫苗和快速诊断技术研究,对猪链球菌2型的病理学缺乏系统研究。本文从华东某地区某猪场发生猪链球菌病样品中分离出一株猪链球菌,并进行了病原学研究,同时还运用猪链球菌2型四川分离株SSsc0501对仔猪进行实验性感染,开展系统的病理学研究。(一)猪链球菌2型的分离、鉴定及其荚膜多糖2J基因的克隆与序列分析2006年,华东地区某猪场饲养的猪急性发病,我们从病死猪的病料中成功分离到一株猪链球菌,经革兰氏染色、血清凝集试验和PCR鉴定,确诊为猪链球菌2型。通过对毒力因子的鉴定,结果发现MRP和EF均为阳性。将猪链球菌2型分离株用针对其CPS2J序列的特异性引物进行扩增,得到与预期大小相符的DNA片段,将PCR产物回收、连接、转化后测序,得到了676bp的核酸序列,同源性分析表明,SS2-HD01株CPS2J序列与已公布的国内外猪链球菌2型菌株核苷酸同源性在92.8%~99.9%之间,具有较高的同源性;与猪链球菌1型的同源性只有46.3%。(二)实验性感染猪链球菌2型的病理学研究选用40日龄体征健康的断奶仔猪10头,用2005年猪链球菌2型四川分离株SSsc0501通过肌肉注射进行人工感染,研究猪链球菌2型引起的仔猪各组织器官的病理学特征。结果表明,仔猪在人工感染22小时后出现临床症状,此后48小时内全部死亡,说明该2型猪链球菌对体征健康的仔猪致病性很强。该2型链球菌主要引起仔猪多器官出血性败血症。肝脏出血,肝索排列不齐,窦状隙内充满红细胞,中央静脉内有炎性细胞渗出,且中央静脉发生淤血。肝细胞发生肿胀,可见颗粒变性、水泡变性和脂肪变性;心脏无明显病变;脾脏出血,尤其是中央动脉周围出血严重,淋巴细胞减少,部分淋巴细胞坏死;肺脏可见间质性肺炎,肺泡的间隔增宽,出血,有大量炎性渗出,部分间质出现坏死灶,其中还发现有细菌,部分间质部血管出现透明血栓,支气管内有浆液性渗出物。肾脏髓质部间质出血,肾小球出血,部分肾小球出现萎缩,肾小囊增宽,出血。肾小管上皮细胞肿胀,细胞壁增厚,局部肾小管上皮细胞开始脱落;淋巴结出血,局部淋巴细胞发生坏死;大脑脑膜血管淤血,有大量炎性细胞,部分血管形成透明血栓,大脑出现噬神经元现象。肠道以出血症状为主,部分肠道出现炎性细胞渗出。
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