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背景:尽管黑色素瘤的发病率在皮肤恶性肿瘤中占比不高,但却导致了约75%的皮肤癌相关死亡率,Ⅳ期转移性黑色素瘤5年生存率小于20%,10年生存率小于15%。尽管在过去的十年中,由于免疫治疗和靶向治疗的发展,黑色素瘤的临床结果有了显著改善,但并非所有患者对系统疗法反应良好。因此,我们需要更进一步的研究黑色素瘤发生及发展的机制。碱基切除修复（BER）是准确去除因化疗引起的烷基化、放疗引起的氧化反应而破坏的碱基所必需的。脱嘌呤/脱嘧啶（AP）内切酶是BER中识别和处理AP位点的关键酶,人类最主要的AP内切酶是脱嘌呤/脱嘧啶脱氧核糖核酸内切酶1（APEX1）,也称HAP1,APE1或Ref-1,近年来,不少研究发现黑色素瘤组织及细胞系中APEX1高表达,并介导下游的抗凋亡信号,导致更高的增殖潜能和选择性生长优势。由于二代测序的普及,越来越多的研究发现Lnc RNAs在多种疾病和肿瘤的进程中起重要作用,黑色素瘤中也存在许多差异表达的Lnc RNA,并作为黑素瘤进展和转移的有效调控因子。LINC00470在肝癌、胃癌、多形性胶质瘤等多种恶性肿瘤中过表达,并且与较差的临床预后相关。目的:明确LINC00470、APEX1对黑色素瘤增殖侵袭的作用,并探讨其分子机制。方法:1、使用Lnc RNA芯片筛选出不同雄激素受体（AR）表达水平黑色素瘤细胞株之间的差异性表达Lnc RNA,使用real-time PCR验证差异Lnc RNA在黑色素瘤组织及细胞系中的表达水平,选定LINC00470作为研究对象。过表达和干扰LINC00470,通过MTT、克隆形成、transwell等功能实验研究其在黑色素瘤细胞增殖、侵袭中的作用。2、进行芯片生信分析和CHIP-seq数据库查阅发现LINC00470可能通过结合锌指蛋白131（ZNF131）调控APEX1的表达,过表达和干扰LINC00470后,使用real-time PCR、WB检测APEX1表达水平变化,在干扰LINC00470的黑色素瘤细胞株中过表达APEX1,功能实验提示LINC00470可能通过APEX1起作用。通过real-time PCR、WB检测APEX1在黑色素瘤中的表达情况,过表达及干扰APEX1的表达,通过功能实验研究其在黑色素瘤细胞增殖、侵袭中的作用。3、使用RIP、RNA-pulldown实验检验LINC00470与ZNF131之间的相互作用,使用CHIP、双荧光素酶实验检测ZNF131与APEX1之间的相互关系。过表达及干扰ZNF131,研究其在黑色素瘤细胞增殖、侵袭中的作用。4、通过皮下移植瘤模型,在体内进一步验证LINC00470、APEX1与黑色素瘤生长的关系。结果:1、Real-time PCR结果显示LINC00470在黑色素瘤细胞系和组织中的相对表达量明显高于正常黑色素细胞和瘤旁组织。MTT、克隆形成、transwell实验结果显示过表达LINC00470可以促进黑色素瘤细胞的增殖、克隆形成及侵袭能力,干扰LINC00470抑制黑色素瘤细胞的增殖、克隆形成及侵袭能力。2、过表达LINC00470后APEX1蛋白表达上调,干扰LINC00470后APEX1蛋白表达下调;并且功能实验显示过表达APEX1能够部分逆转干扰LINC00470对黑色素瘤细胞的抑制作用,干扰APEX1能够部分逆转过表达LINC00470对黑色素瘤细胞的促进作用。WB结果显示APEX1在黑色素瘤组织中的表达高于瘤旁组织,MTT、克隆形成、transwell实验结果示过表达APEX1可以促进黑色素瘤细胞的增殖、克隆形成及侵袭能力。提示LINC00470通过上调APEX1促进黑色素瘤细胞的增殖、侵袭。3、RIP和RNA pull-down实验结果示LINC00470与ZNF131之间存在物理结合,Ch IP实验结果示ZNF131能与APEX1启动子结合,双荧光素酶法证实ZNF131可与APEX1启动子区域相结合,并起到负向调节作用,MTT、克隆形成、transwell实验结果显示过表达ZNF131可以促进黑色素瘤细胞的增殖、克隆形成及侵袭能力。提示LINC00470结合转录因子ZNF131靶向调控黑色素瘤细胞中APEX1的表达,最终促进了黑色素瘤细胞的增殖和侵袭。4、动物实验结果显示,干扰黑色素瘤中LINC00470的表达后,肿瘤生长减慢、体积缩小,而过表达APEX1能够逆转这一现象。皮下移植瘤组织的WB和免疫组化结果显示,LINC00470表达下调后ZNF131与APEX1的蛋白表达均下调,而过表达APEX1后,APEX1蛋白表达上调,ZNF131的蛋白水平无明显变化,与之前的体外实验及临床标本检测结果相符,进一步验证LINC00470及ZNF131是APEX1的上游调控因子。结论:综上所述,LINC00470通过上调APEX1的蛋白表达促进黑色素瘤的增殖和侵袭,提示LINC00470有可能成为治疗黑色素瘤的潜在靶点。