3D打印PLA-HA复合材料生物相容性及构建组织工程骨的实验研究

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目的:探讨以骨髓基质细胞作为种子细胞与3D打印PLA-HA复合支架材料的生物相容性;观察3D打印PLA-HA复合材料体内成骨性能,为进一步在临床修复大段骨缺损奠定理论基础。方法:将绿色荧光蛋白标记的骨髓基质细胞分别与3D打印PLA-HA复合材料以及β-TCP进行体外复合培养,采用荧光显微镜、扫描电镜、CCK8法以及碱性磷酸酶活性测定法检测细胞的生长黏附、增殖力及碱性磷酸酶活性的变化;选择新西兰兔的胫骨内侧构建体内生物反应器模型。实验分为两组:实验组包括骨髓基质细胞、3D打印PLA-HA复合材料、骨膜以及隐血管束;对照组包括骨髓基质细胞、3D打印PLA-HA复合材料、骨膜。待取材后,采取聚合酶链式反应、显微CT检测法、HE染色分别行骨分化相关基因、骨形态计量分析和组织学观察和检测。结果:3D打印PLA-HA复合材料在12h时的细胞粘附率可达到60%以上;其细胞增殖量在第4天和第7天与β-TCP组相比有统计学差异;在复合培养的第3天,第7天和第14天其ALP含量与对照组相比具有统计学差异,且在第7天时其ALP活性较β-TCP组高。体内实验结果表明,实验组OPN及COLⅠ的相对表达量较对照组多;显微CT扫描结果显示,实验组新生骨组织体积及骨小梁相对数目较对照组高;组织学观察结果显示,实验组有新生骨组织形成,部分新生骨组织为编织骨,骨细胞体积大,数量多,新生血管密度较多;对照组可见部分新生骨样组织形成,骨细胞分化较成熟。结论:3D打印PLA-HA复合材料具有良好的生物相容性,可作为骨组织工程的支架材料;3D打印PLA-HA复合支架材料符合构建功能相对完善的组织工程骨的要求。
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