肾癌,又称肾细胞癌(renal cell carcinoma, RCC),是一种泌尿系统特有的恶性肿瘤,发病率次于膀胱癌,在泌尿系肿瘤中占据第二位。由于其不具备特异的临床病症状,使得早期诊断和治疗具有一定的难度。目前,RCC病例中有30%-50%属于偶然发现的无症状患者,而且,约30%的患者在诊断时已经或将发生转移病变。研究发现,早期侵袭转移是造成肿瘤预后不良的主要原因,而且,发现基因甲基化与肿瘤的侵袭转移密切相关。TET1 (Ten Eleven Translocation 1)是体内一种高效催化DNA胞嘧啶的加氧酶,具有明显的去甲基化作用,在多种肿瘤组织,如肝细胞癌、鳞状细胞肺癌、前列腺癌、膀胱癌中低表达。目前,关于TET1在RCC发病机制中作用尚不明确。因此,探讨TET1在RCC侵袭转移中的作用,对RCC的诊断、治疗具有极其重要的意义。第一部分TET1在肾癌组织中的表达目的：检测TET1在肾癌组织、癌旁组织的表达差异。方法：采用实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR, qRT-PCR)检测82例肾癌患者的癌组织和癌旁组织TET1 mRNA的表达水平,同时采用免疫组化(Immunohi stochemi stry)和蛋白质印迹法(Western blot, WB)对癌组织和癌旁组织中的TET1蛋白表达水平进行检测,对检测结果进行对比、分析。结果：qRT-PCR结果显示肾癌组织中TET1 mRNA的表达水平明显低于癌旁组织(p<0.05)。免疫组化与蛋白质印迹法的结果显示,肾癌组织中TET1蛋白表达平明显低于癌旁组织(p<0.05)。结论：TET1 mRNA及蛋白表达水平在肾癌组织中均显著下调,表明TET1可能直接或间接的参与肾癌的发生与发展。第二部分 肾癌TET1低表达在临床中的意义目的：对比TET1在肾癌组织和癌旁组织的表达水平,并分析肾癌病理分级、临床分期、淋巴结转移、TET1表达与肾癌患者预后的关系。方法：对性别、年龄、分期、分级等临床病理参数、TET1表达与术后生存进行相关性分析,采用Kaplan-Meier法对肾癌患者进行生存分析,以log rank比较生存率。p<0.05或p<0.01时认为具有统计学意义。结果：生存分析结果显示,TET1表达越低,生存期越短。单因素及多因素分析表明,肿瘤分期、淋巴结转移及TET1低表达导致的DNA高度甲基化与肾癌的预后有关。结论：TET1的表达水平与肾癌患者的预后密切相关。第三部分TET1对肾癌细胞功能及肿瘤进展的影响目的：通过细胞功能实验,研究分析TET1表达与肾癌细胞功能及肿瘤进展的关系。方法：首先使用蛋白质印迹法(WB)测定肾癌细胞系ACHN和人胚肾细胞系293T中的表达水平,然后采用Cell Counting Kit-8 (CCK-8)法测定肾癌细胞ACHN和293T细胞的增殖能力,Transwell小室检测肾癌细胞ACHN和293T的侵袭能力,对实验结果进行比较分析。结果：与293T细胞相比,TET1在肾癌细胞系ACHN的表达显著降低(p<0.05)。CCK-8和Transwell小室检测结果显示,TET1低表达的肾癌细胞系ACHN的增殖能力和侵袭能力均显著高于TET1高表达的293T。结论：TET1在肾癌细胞系中低表达,提示TET1可能参与肾癌的发生和发展。第四部分TET1过表达对肾癌细胞凋亡和侵袭能力的影响和可能的分子机制目的：研究分析TET1过表达对肾癌细胞凋亡和侵袭能力的影响及可能的分子机制。方法：首先转染TET1过表达质粒于肾癌细胞ACHN,采用蛋白质印迹法(WB)检测TET1在过表达质粒和对照质粒的肾癌细胞ACHN的表达水平,然后使用Annexin V和PI染色的方法通过流式细胞仪检测两种细胞的凋亡情况；Transwell法分析两种细胞的侵袭能力,对结果进行比较分析。WB法检测过表达TET1对Wnt信号信号通路相关蛋白表达水平的影响。结果：蛋白质印迹法显示肾癌细胞ACHN成功表达了TET1蛋白,成功过表达TET1蛋白的肾癌细胞ACHN凋亡率增加,侵袭能力降低,Wnt相关蛋白β-catenin和C-myc等蛋白显著下调。结论：TET1蛋白过表达能有效促进肾癌细胞的凋亡,抑制肾癌细胞侵袭,可能与Wnt信号通路的下调有关。