甘草酸对发育期大鼠惊厥后脑损伤的保护及其机理研究

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目的:本实验目的在探讨GA(甘草酸)预处理后,能否通过抑制海马神经元死亡、小胶质细胞活化、BBB破坏及下调RAGE、VEGF、ERK、TNF-α表达,对发育期大鼠惊厥后脑损伤有保护作用。方法:SD雄性大鼠48只,21日龄,随机分为:对照(生理盐水)组、PTZ(戊四唑)组、20mg/kg GA+PTZ组、40mg/kg GA+PTZ组,n=12。通过腹腔注入戊四唑(PTZ),制作发育期大鼠惊厥模型,造模成功标准需达到Racine评分Ⅳ-Ⅴ级。GA在PTZ诱导惊厥发作前2h腹腔注入给药。惊厥发作后24h,处死大鼠取脑组织,记录惊厥发作时间、等级及潜伏期;苏木素-伊红(HE)染色观察脑组织病理形态改变;免疫荧光(IF)染色观察海马小胶质细胞活化情况;伊文思蓝(EB)渗透实验检测血脑屏障通透性;蛋白质印迹法(WB)检测海马RAGE、VEGF、ERK、TNF-α蛋白表达;实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测海马RAGE、VEGF、ERK、TNF-αm RNA的表达。结果:1.与PTZ组相比,40mg/kg GA+PTZ组惊厥发作潜伏期显著延长(P<0.05);2.与PTZ组相比,GA组惊厥发作时间显著缩短(P<0.05);两组GA组相比较惊厥发作时间,有统计学意义(P<0.05);3.与PTZ组相比,40mg/kg GA+PTZ组惊厥发作级别显著降低(P<0.05);4.HE染色结果提示,PTZ组出现神经元核深染、固缩和细胞疏松、水肿;GA组神经元内核深染、固缩和细胞疏松、水肿减轻;5.IF染色结果提示,与对照组相比,PTZ组活化小胶质细胞数明显增加(P<0.05);与PTZ组相比,GA组活化小胶质细胞数明显减少(P<0.05);6.EB染色结果提示,与对照组相比,PTZ组脑组织内伊文思蓝含量显著增加(P<0.05);与PTZ组相比,GA组脑组织内伊文思蓝含量显著降低(P<0.05);7.Western Bolt:与对照组相比,PTZ组RAGE、VEGF、ERK2、TNF-α蛋白表达显著升高(P<0.05);与PTZ组相比,GA组的RAGE蛋白表达均显著降低(P<0.05),40mg/kg GA+PTZ组VEGF、ERK2、TNF-α蛋白表达也显著降低(P<0.05);8.q RT-PCR:与对照组比,PTZ组RAGE、VEGF、ERK2、TNF-αm RNA表达均显著升高(P<0.05);与PTZ组比,GA组RAGE、VEGF、ERK2、TNF-αm RNA表达均显著降低(P<0.05);与20mg/kg GA+PTZ组相比,40mg/kg GA+PTZ组对RAGE、TNF-αm RNA表达抑制作用明显增强(P<0.05)。结论:1.GA预处理可以减轻惊厥发作严重程度、延长发作潜伏期。2.GA预处理对发育期大鼠惊厥后脑损伤有保护作用,可能与抑制海马神经元死亡、小胶质细胞活化、BBB破坏及下调RAGE、VEGF、ERK、TNF-α的表达有关。
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