论文部分内容阅读
目的:本研究旨在调查FGF3/FGF4/FGF19基因共同扩增在中国肝细胞癌（HCC）患者中的分布情况,探索HCC患者发生FGF3/FGF4/FGF19基因共同扩增与临床病理特征、预后之间的关系,进而为临床管理不同基因状态的HCC提供新思路。方法:本研究收集了2016年4月1日至2019年12月30日因HCC在青岛大学附属医院行根治性肝切除术且患者同意行二代基因测序的组织标本共253例,使用QIAamp?DNA FFPE组织试剂盒（Qiagen,Hilden,Germany）分别提取FFPE肿瘤组织和配对癌旁组织中的DNA。通过二代测序产品元溯450TM（中国上海至本医疗科技公司）完成测序和基因组分析。本研究利用Nova Seq 6000（美国加利福尼亚州Illumina公司）测序平台对基因进行捕获和测序,平均深度为1000×。主要鉴定的基因变异类型包括:单核苷酸变异（SNVs）、短和长插入/缺失（In Dels）、拷贝数变异（CNV）、基因重排（Arrangement）和基因融合（Fusion）。同时,收集并分类整理患者的临床病理资料和变异基因信息。将无病生存期（DFS）、复发后生存时间（SAR）和总生存时间（OS）作为研究的终点。肝功能良好（Child-Pugh A）且吲哚菁绿清除试验（ICG-R15）<30%的可切除的复发性HCC（r-HCC）患者再次行肝切除术;肝功能为Child-Pugh A或B的肝内或肝外多发肿瘤、伴大血管侵犯的不可切除者行经动脉化疗栓塞（TACE）联合靶向治疗;靶向治疗进展者或无法耐受者给予免疫治疗;不愿或不能接受手术治疗或系统治疗的患者（高龄、经济条件差等）给予单纯TACE治疗。所有患者的临床资料和随访信息均通过我院His系统、电话回访获得。变异基因（FGF3/FGF4/FGF19共同扩增）在分类变量组间的分布差异采用Pearsonχ2检验,不满足卡方条件者使用连续校正χ2检验或Fisher精确概率法。采用寿命表法估计累积复发率和累积生存率,生存分析采用Kaplan-Meiers法计算DFS、SAR和OS,并用对数秩检验进行比较。单因素分析中P<0.1的因素纳入多因素Cox比例风险回归模型以确定影响HCC患者根治性切除术后无病生存时间的独立危险因素。本研究的所有数据分析均采用SPSS 24.0统计软件（美国纽约市IBM公司）完成。所有的数据分析都是通过以双侧P<0.05为差异有统计学意义。结果:在253例癌组织中发现有30例存在FGF3、FGF4、FGF19基因改变:其中单独发生FGF19突变者6例（4例发生基因扩增,2例发生点突变:c.398T>C、c.214C>T）;单独发生FGF4突变者1例（变异形式为SNV:A:T>C:G）;未观察到FGF3单独变异;FGF3、FGF4、FGF19基因同时发生变异者23例（三者变异形式均为CNV）,该变异发生率约为9.09%（23/253）。FGF3/FGF4/FGF19扩增主要发生在染色体11q13.3区域,并且通常伴随CCND 1基因的扩增（χ2=43.481,P<0.000）。253例癌旁组织中均未检测到FGF3、FGF4、FGF19基因变异。在本组HCC中突变率排名前十的基因依次为:TP 53（56.13%）、TERT（42.69%）、CTNNB1（24.11%）、AXIN 1（15.42%）、ARID 1A（11.46%）、RB 1（11.07%）、TSC 2（10.67%）、ATM（9.09%）、CCND 1（4.74%）、MYC（3.95%）。本研究发现,在CD 10（-）、TP 53突变、CCND 1扩增的患者中发生FGF3/FGF4/FGF19基因共扩增的频率明显更高（P<0.05）;然而,在年龄、性别、血型、BMI、服用核苷酸类药物、吸烟史、酗酒史、高血压、糖尿病、乙型病毒性肝炎、肝硬化、门静脉高压症、术前腹水、恶性肿瘤家族史、Child-Pugh分级、ALT、AST、STB、GGT、ALP、AFP、PNI、CNLC分期、肿瘤数目、肿瘤最大直径、肿瘤分化程度（Edmondson分级）、MVI、PVTT、卫星病灶、肿瘤坏死、TERT突变、CTNNB 1突变、AXIN 1突变、TMB等因素分组间,FGF3/FGF4/FGF19基因共同扩增的分布差异无统计学意义（P>0.05）。通过Kaplan-Meier法估计基因扩增型和野生型患者之间DFS和OS的差异,结果提示:FGF3/FGF4/FGF19基因共扩增组患者的中位DFS时间明显比未发生FGF3/FGF4/FGF19基因共扩增组患者的更短（10.5个月vs.43.6个月,P=0.003）;FGF3/FGF4/FGF19基因共扩增组患者的1年、2年和3年累积总体生存率分别为89.1%、76.2%和68.6%,明显低于未发生FGF3/FGF4/FGF19基因共扩增组（98.5%、92.0%和84.6%）（P=0.020）。将单因素分析中影响HCC患者DFS的因素（P<0.1）纳入多因素Cox比例风险回归模型分析提示,肿瘤多发（HR=2.457,95%CI=1.441-4.188,P=0.001）和FGF3/FGF4/FGF19共同扩增（HR=2.114,95%CI=1.028-4.347,P=0.042）是独立于其他因素并能预测HCC患者外科根治性切除术后不良无病生存期的独立危险因素。而对于FGF3/FGF4/FGF19共扩增组患者而言,血清AFP≥400 ng/ml、肿瘤多发、未服用核苷类药物抗病毒治疗、术前ALP>125 U/L是影响其术后DFS不佳的重要因素（P<0.05）。本研究中位随访时间26.6个月（6.0个月-64.4个月）,随访期间观察到91例患者复发,复发率为62.6%（91/243）;该91例HCC患者的复发后中位生存时间（m SAR）为34.9个月（95%CI:20.05个月-49.75个月）。相对于未发生FGF3/FGF4/FGF19共扩增的r-HCC患者,FGF3/FGF4/FGF19共扩增的r-HCC患者对TACE联合靶向治疗有较好的响应（P=0.025）,而对单纯TACE治疗（P=0.000）或免疫治疗（P=0.025）的响应较差。结论:我国HCC患者组织中FGF3/FGF4/FGF19基因共扩增在CD10（-）、TP 53突变和CCND 1扩增的肿瘤组织中发生频率更高,但本研究尚未发现FGF3/FGF4/FGF19基因扩增状态与任何患者临床参数之间的相关性。肿瘤组织中FGF3/FGF4/FGF19基因的扩增状态与HCC患者外科根治性切除术后的DFS和OS密切相关。相对于未发生FGF3/FGF4/FGF19共扩增的r-HCC患者,FGF3/FGF4/FGF19共扩增的r-HCC患者对TACE联合靶向治疗有较好的响应（P=0.025）,而对单纯TACE治疗（P=0.000）或免疫治疗（P=0.025）的响应较差,本研究的这些发现可能为HCC的临床管理策略提供新的见解。