常山碱和苦参碱在肉鸡体内的残留消除规律及肝毒性研究

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化学性药物在畜禽养殖过程中的广泛使用不可避免的导致其在动物源食品中的残留。虽然国家颁布了一系列法律法规来限制其应用,但化学性药物在动物性食品中残留超标的事件仍然时有发生。随着“减抗限抗令”的发布,中草药在畜禽养殖中的应用越来越广泛。常山碱是常山的活性成分,对鸡球虫病、蓝氏贾第鞭毛虫病等具有较好的治疗效果,但其具有较强毒性。苦参碱是苦参、山豆根等中药的活性成分,具有良好的抗菌、抗病毒、抗寄生虫效果,但其具有中等毒性。目前,常山碱和苦参碱对食品动物及动物性食品的安全性还没有深入的研究。试验一:本研究将常山提取物按照不同剂量添加到饲料中,对肉鸡进行连续10天的饲喂,采集停药后第0、1、3、5、7、10、14天的肝脏、肾脏、肌肉样本,经胰蛋白酶预处理,乙酸乙酯、乙酸铵、正己烷提取,HLB固相萃取柱净化后,采用超高效液相色谱法检测常山碱和异常山碱的残留量。结果表明,常山碱和异常山碱在肉鸡体内的残留主要以组织结合形式存在(约占90%以上)。停药0天,两种生物碱在各组织中的残留浓度均很高,其中以肾脏中浓度最高。停药1天,两种生物碱在各组织中的残留浓度快速下降(约60%~80%),然后降速减缓。停药7天,在肌肉和肾脏中检测不到二者残留。停药14天,在肝脏中检测不到二者残留(低剂量组在第10天)。常山碱和异常山碱在不同组织中的消除速度为:肾脏>肌肉>肝脏,肝脏为检测常山碱残留的最佳靶组织。试验二:将苦参提取物按照不同剂量添加到饲料中,对肉鸡进行连续10天的饲喂,采集停药后第0、1、3、5、7、10、14天的肝脏、肾脏、肺脏、肌肉、血浆样本,经胰蛋白酶预处理,甲醇提取,C18固相萃取柱净化后,以超高效液相色谱法检测苦参碱的残留量。结果表明,苦参碱在肉鸡体内的残留主要以组织结合形式存在(约占90%以上)。停药0天时,肝脏中残留浓度最高。停药1天血浆中即检测不到苦参碱残留,停药5天肺脏中检测不到苦参碱残留,停药7天肾脏中检测不到其残留(低剂量组在第5天),停药10天肝脏和肌肉中检测不到其残留(低剂量组肌肉在第5天)。苦参碱在不同组织中的消除速度为:血浆>肺脏>肾脏>肌肉>肝脏,肝脏为检测苦参碱残留的最佳靶组织。试验三:将常山提取物和苦参提取物分别对肉鸡进行连续10天的饲喂,采集停药后第0、3、7天的血浆和肝脏样本,利用试剂盒检测肝细胞酶的变化。结果显示,血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶含量升高,碱性磷酸酶、胆碱酯酶水平降低,由此确定这两种生物碱会对肝脏造成一定损伤。肝组织中白细胞介素6、白细胞介素10、肿瘤坏死因子含量均升高,由此确定肝损伤可能与炎症反应有关。肝组织中谷胱甘肽和超氧化物歧化酶水平无显著变化,由此确定肝损伤可能与氧化应激反应无关。本文研究了常山碱与苦参碱在肉鸡体内的残留消除规律,并初步研究了二者造成肝损伤的机制,所得结果可直接评估常山碱和苦参碱对动物性食品安全的影响,也可为今后评价二者能否获批新兽药提供一定数据参考。
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