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研究目的:NF-κB作为转录因子家族成员之一,是细胞内最重要的核转录因子,它在多种由细胞刺激介导的细胞信号转导和调控中起着核心作用,参与大量基因的表达和调控,是细胞激活的重要标志。已有研究表明,NF-κκB在不同细胞中表现出了不同的调节细胞增殖的能力,而且它参与调控了多种miRNA的表达。MicroRNA(miRNA)是一类由内源基因编码的长度约为20-24个核苷酸的非编码单链RNA分子,它们在动植物中参与了转录后基因的表达和调控,且调节作用涉及生长发育,细胞分化,细胞凋亡,脂肪代谢等诸多生命过程。大量研究表明,在肿瘤细胞中,miRNAs的表达与正常癌组织相比存在着较大的差异,这就提示我们miRNAs在肿瘤的发生发展过程中发挥着一定的作用。本研究主要为了探寻NF-κB对宫颈癌细胞生长的影响,以及受NF-κB调控的下游microRNAs是否参与到了宫颈癌细胞生长的调控,并且深入研究这个调控通路的作用机制。研究方法:我们采用了 MTT和集落形成实验分别检测NF-κB对HeLa和C33A细胞生长活性和增殖能力的影响,在确认NF-κB与宫颈癌细胞的生长相关之后,我们用实时定量PCR技术验证了 miR-130a,一个可能受到NF-κB调控的microRNA在NF-κB水平变化之后表达水平的变化。接下来我们研究了 miR-130a对宫颈癌细胞增殖的作用,我们采用了 MTT和集落形成实验分别检测它对HeLa和C33A细胞生长活性和增殖能力的影响。之后,通过生物信息学方法预测了miR-130a的可能靶位点且挑选出其中与肿瘤生长密切相关的靶基因作为研究对象,并检测miR-130a对含有靶基因 3’UTR的荧光报告载体表达水平的影响,之后又利用实时定量PCR和Western blot实验技术检测在miR-130a水平不同的HeLa和C33A细胞中靶基因mRNA和蛋白水平的变化,从而进一步验证miR-130a对靶基因的调控方式,而后我们构建了过表达靶基因的质粒(此质粒不含3’UTR),将其转染到HeLa和C33A细胞中,通过检测细胞表型的改变,阐明了 miR-130a对细胞生长的调控机制。最后,我们过表达NF-κB质粒,用Western blot技术检测NF-κB对靶基因的表达的影响,再用已纯化好的靶基因编码的蛋白刺激细胞,检测它对NF-κB的刺激作用,验证信号通路是否存在反馈调节作用。研究结果:细胞生长实验的结果表明过表达NF-κB促进了宫颈癌细胞的生长及增殖,实时定量PCR的结果表明,过表达NF-κB后miR-130a的表达水平也随之上升。细胞生长实验的结果表明过表达miR-130a促进了宫颈癌细胞的生长及增殖,封闭miR-130a后抑制了宫颈癌细胞的生长增殖。靶基因筛选得到TNF-α为miR-130a的候选靶基因,其3’非翻译区包含miR-130a的潜在结合位点。荧光报告载体实验证实,miR-130a能够抑制带有TNF-α靶位点的报告基因的表达。实时定量PCR和Western blot的结果同时表明miR-130a能够在mRNA水平和蛋白水平抑制TNF-α靶基因功能研究表明,过表达TNF-α能够降低由miR-130a引起的细胞活性和增殖能力的提高。Western blot结果显示,过表达NF-κB能够使TNF-α的水平降低,而免疫荧光结果说明TNF-α能够激活NF-κB使其进入细胞核增多。结论:NF-κB可以促进宫颈癌细胞的生长,其发挥调节作用可能是通过NF-κB进入细胞核后通过提高了 miR-130a的表达水平进而抑制了 TNF-α的表达来实现的,而TNF-α的降低会使NF-κB入核减少,形成了负反馈的调节机制。