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猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type2, PCV2）是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（Post-weaning multisystemic wasting syndrome, PMWS）的主要病原，该病原现已在世界各地广泛流行，给养猪业造成巨大经济损失。PCV2含2个主要的开放阅读框ORF1和ORF2，分别编码与病毒复制相关的蛋白Rep和Rep’以及病毒的结构蛋白Cap。Cap蛋白是PCV2的主要免疫保护性抗原，能诱导动物机体产生针对PCV2的中和抗体和保护性免疫力，是研制PCV2基因工程疫苗的理想靶抗原。研究表明，IFN-γ、IL-2和GM-CSF等细胞因子佐剂对疫苗具有免疫增强作用，可显著增强疫苗的免疫保护效力。本研究采用细胞因子佐剂与PCV2-Cap蛋白组合的策略来研制预防PCV2感染的新型基因工程亚单位疫苗，目的是验证猪源IFN-γ（PoIFN-γ）、IL-2（PoIL-2）和GM-CSF（PoGM-CSF）这3种细胞因子能否增强PCV2-Cap蛋白亚单位疫苗的免疫效力。为鉴定PoIFN-γ对PCV2-Cap蛋白亚单位疫苗的免疫增强作用，以杆状病毒表达系统表达PCV2-Cap蛋白、PoIFN-γ及二者的融合蛋白Cap-PoIFN-γ，制备3种PCV2亚单位疫苗：Cap-PoIFN-γ疫苗、PCV2-Cap+PoIFN-γ疫苗及PCV2-Cap疫苗，并经鼠体免疫攻毒试验鉴定3种亚单位疫苗的免疫保护效力。采用IPMA和阻断ELISA方法分别测定免疫及攻毒后PCV2IPMA抗体和中和抗体滴度，结果表明，与Cap-PoIFN-γ疫苗和PCV2-Cap疫苗对比，PCV2-Cap+PoIFN-γ疫苗能诱导产生更高水平的IPMA抗体和中和抗体滴度。淋巴细胞增殖试验检测结果表明，PCV2-Cap+PoIFN-γ疫苗诱导脾淋巴细胞增殖的能力明显高于Cap-PoIFN-γ疫苗和PCV2-Cap疫苗。攻毒后，PCV2-Cap+PoIFN-γ疫苗免疫组鼠肺脏中PCV2病毒载量明显低于Cap-PoIFN-γ疫苗和PCV2-Cap疫苗免疫组，表明PCV2-Cap+PoIFN-γ疫苗能诱导产生更强的保护性免疫力。本研究证实用PoIFN-γ与PCV2-Cap蛋白混合免疫时，PoIFN-γ能显著增强PCV2-Cap蛋白亚单位疫苗的免疫保护效力。为验证PoIL-2和PoGM-CSF对PCV2-Cap蛋白亚单位疫苗的免疫增强作用，以杆状病毒表达系统表达PoIL-2、PoGM-CSF及PCV2-Cap蛋白与这２种细胞因子的融合蛋白Cap-PoIL-2和Cap-PoGM-CSF，制备5种PCV2亚单位疫苗：Cap-PoIL-2疫苗、PCV2-Cap+PoIL-2疫苗、Cap-PoGM-CSF疫苗、PCV2-Cap+PoGM-CSF疫苗及PCV2-Cap疫苗，并经鼠体免疫攻毒试验鉴定5种亚单位疫苗的免疫保护效力。采用IPMA方法测定免疫及攻毒后PCV2抗体滴度，结果表明，PCV2-Cap+PoIL-2疫苗、Cap-PoGM-CSF疫苗、PCV2-Cap+PoGM-CSF疫苗和PCV2-Cap疫苗诱导产生的IPMA抗体滴度相当，但均显著高于Cap-PoIL-2疫苗。淋巴细胞增殖试验和细胞因子检测结果表明，与Cap-PoIL-2疫苗和PCV2-Cap疫苗对比，PCV2-Cap+PoIL-2疫苗、Cap-PoGM-CSF疫苗和PCV2-Cap+PoGM-CSF疫苗可明显提高鼠脾淋巴细胞的增殖能力，刺激脾淋巴细胞分泌更高水平的IFN-γ和IL-2。攻毒后，PCV2-Cap+PoIL-2疫苗、Cap-PoGM-CSF疫苗和PCV2-Cap+PoGM-CSF疫苗免疫组鼠肺脏中PCV2病毒载量明显低于Cap-PoIL-2疫苗和PCV2-Cap疫苗免疫组，表明这３种疫苗能诱导产生更强的保护性免疫力。本研究证实用PoIL-2或PoGM-CSF与PCV2-Cap蛋白混合免疫或以Cap-PoGM-CSF融合蛋白免疫时，PoIL-2和PoGM-CSF均能明显提高PCV2-Cap蛋白亚单位疫苗的Th1型免疫应答，从而增强疫苗的免疫保护效力。口蹄疫病毒（Foot and mouth disease virus, FMDV）是感染偶蹄目动物的重要病原，在世界范围内引发急性、热性和高度接触性传染病，给全球养殖业造成巨大经济损失。FMDV包括4种结构蛋白Vp1、Vp2、Vp3和Vp4，其中Vp1蛋白是病毒的主要免疫原性蛋白，能诱导动物机体产生中和抗体。近年来，我国猪群中PCV2和猪O型FMDV流行十分严重，当前对这2种病毒性疫病的防控主要采用灭活疫苗，但PCV2灭活疫苗存在病毒难培养的现实，FMDV灭活疫苗存在灭活不彻底而散毒的危险。研究表明，利用重组蛋白研制的亚单位疫苗对PCV2和FMDV感染具有良好的免疫效果，因此，研制同时预防这2种病毒性疫病的二联亚单位疫苗具有重要意义。本研究采用杆状病毒表达系统表达PCV2-Cap蛋白、FMDV-Vp1蛋白、Cap-Dual-Vp1双表达产物及Cap-Linker-Vp1融合蛋白，制备4种PCV2与FMDV二联亚单位疫苗：Cap-Dual-Vp1-A疫苗、Cap-Dual-Vp1-B疫苗、Cap-Linker-Vp1疫苗及PCV2-Cap+FMDV-Vp1疫苗，并经鼠体免疫试验证实4种二联苗均可诱导产生较高水平的PCV2特异性抗体和抗FMDV-Vp1抗体，且抗体滴度无明显差异。鉴于PCV2-Cap与FMDV-Vp12种蛋白双表达及融合表达的效率均较低，从生产成本角度考虑，可采用PCV2-Cap蛋白与FMDV-Vp1蛋白混合的策略来研制防控PCV2和FMDV感染的二联亚单位疫苗。本研究为进一步研制PCV2与FMDV二联亚单位疫苗奠定了基础。