【摘 要】
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猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是一种严重危害世界养猪业的高度传染性疾病,其病原体PRRSV自出现至今已有30余年的历史,目前仍未出现有效的应对方法。由于PRRSV感染后会逃逸并破坏宿主的免疫系统造成持续感染和免疫抑制,极难开展防控工作。因此,我们需要继续深入研究,从分子机理上阐明机体抵御PRRSV的机制,为
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猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是一种严重危害世界养猪业的高度传染性疾病,其病原体PRRSV自出现至今已有30余年的历史,目前仍未出现有效的应对方法。由于PRRSV感染后会逃逸并破坏宿主的免疫系统造成持续感染和免疫抑制,极难开展防控工作。因此,我们需要继续深入研究,从分子机理上阐明机体抵御PRRSV的机制,为开发新型药物或者疫苗提供理论依据和方向指导。核因子I(Nuclear factor I,NFI)蛋白作为一类位点特异性的DNA结合蛋白,能广泛结合细胞或者病毒基因的特定序列并调控多种基因复制和转录。干扰素(Interferon,IFN)是一类由单核细胞和淋巴细胞产生的,具有调节免疫、抗病毒、抗肿瘤等多种功能的细胞因子,PRRSV感染后能抑制I型干扰素(IFN-I)的产生。实验室前期结果表明核因子I/A(NFIA)和NFIB能够促进IFN-I的表达并且抑制PRRSV复制,但目前对其分子机理并不十分清楚。因此,本文以MARC145为PRRSV感染细胞模型,对NFIA和NFIB抑制PRRSV复制的分子机理进行了深入探究。首先,通过NFIA和NFIB的过表达与抑制表达实验证实了NFIA和NFIB可以在MARC145细胞中抑制PRRSV复制;其次,通过截短NFIA和NFIB的基因功能结构域,发现NFIA和NFIB的N末端结构域在其抑制PRRSV复制过程中发挥了重要作用;最后,对NFIA和NFIB的N末端结构域进行了功能位点的突变,结果表明DNA结合的功能位点突变后NFIA和NFIB不再能抑制PRRSV复制。另一方面,通过双荧光素酶报告实验发现NFIA和NFIB的结构域缺失或者功能位点突变后均不能再促进IFN-β的表达。总之,通过本研究发现NFIA和NFIB的N末端结构域在其抑制PRRSV复制和促进干扰素转录方面起到重要作用,初步阐明了NFIA和NFIB抑制PRRSV复制的分子机理,为后续更深入的研究PRRSV天然免疫提供重要参考依据。
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