【摘 要】
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[目的]构建人canstatin克隆载体及重组真核表达载体,观察电脉冲介导骨骼肌内canstatin基因转移对小鼠Lewis肺癌皮下转移瘤生长和肺自发性转移的影响.[方法]用RT-PCR方法从新
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[目的]构建人canstatin克隆载体及重组真核表达载体,观察电脉冲介导骨骼肌内canstatin基因转移对小鼠Lewis肺癌皮下转移瘤生长和肺自发性转移的影响.[方法]用RT-PCR方法从新鲜人胚肝脏组织中钓取canstatin全编码区cDNA.将该片段重组入pGEM-T克隆载体后,重组载体经限制性内切酶酶切鉴定和DNA序列分析.从pGEM-T/canstatin克隆载体中,将人canstatin cDNA亚克隆入真核表达载体pEGFP-N1,构建含人canstatin cDNA的重组质粒pEGFP-N1/canstatin将该重组质粒通过电脉冲转入荷瘤Lewis肺癌小鼠肌肉内,应用RT-PCR、荧光显微镜测量荧光强度、肿瘤称重、肿瘤体积测定及免疫组化的方法检测canstatin基因在体内的表达和抗肿瘤作用.[结论]1.成功构建了重组克隆载体pGEM-T/canstatin和重组真核表达载体pEGFP-N1/canstatin.2.电脉冲介导的骨骼肌内基因转移法的转移效率较单纯质粒注射高且持续时间长;是一种高效安全,简便经济,可能具有一定临床应用价值的基因导入方法.3.电脉冲介导骨骼肌内canstatin基因转移对小鼠Lewis肺癌皮下移植瘤生长和自发性肺转移具有显著抑制作用.
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