【摘 要】
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骨肉瘤（Osteosarcoma,OS）是一种起源于早期谱系骨形成间充质细胞的癌症,主要发生在年轻人和儿童身上,是最常见的恶性骨肿瘤。虽然骨肉瘤发病率低,但其恶性程度高,发生远处转移的骨肉瘤患者死亡率很高,目前尚无有效治疗手段。为了改善骨肉瘤患者的预后以及提高患者的生存质量,有必要从分子水平探究骨肉瘤发生、发展的分子机制。真核生物翻译起始因子（eukaryotic translation init
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骨肉瘤（Osteosarcoma,OS）是一种起源于早期谱系骨形成间充质细胞的癌症,主要发生在年轻人和儿童身上,是最常见的恶性骨肿瘤。虽然骨肉瘤发病率低,但其恶性程度高,发生远处转移的骨肉瘤患者死亡率很高,目前尚无有效治疗手段。为了改善骨肉瘤患者的预后以及提高患者的生存质量,有必要从分子水平探究骨肉瘤发生、发展的分子机制。真核生物翻译起始因子（eukaryotic translation initiation factors,e IFs）通过不同的信号通路参与调控肿瘤的发生、侵袭和转移,但在骨肉瘤中的机制尚不明确。核糖体是蛋白质合成场所,是m RNA和核糖体RNA相互识别的组织者。核糖体蛋白（ribosomal protein,RP）是生物体内核糖体的主要成分,在蛋白质的生物合成过程中起重要作用。核糖体蛋白L34（ribosomal protein L34,RPL34）属于核糖体蛋白L34E家族成员。研究已发现核糖体蛋白L34表达改变与骨肉瘤的发生、发展机制以及患者的预后相关,并且通过生物信息学分析预测发现:上游转录因子c-Myc调控下游RPL34基因表达,RPL34再调控下游e IF3基因表达。因此,我们推测RPL34可能通过c-MYC/RPL34/e IF3信号轴调控人骨肉瘤细胞增殖,但尚未得到实验验证。目的:初步探讨RPL34通过c-MYC/RPL34/e IF3信号轴调控人骨肉瘤细胞增殖的潜在分子机制,为研究骨肉瘤的发生、发展机制提供帮助。方法:构建c-Myc过表达模型,采用q PCR和Western Blot检测c-Myc、RPL34表达水平;采用染色质免疫共沉淀检测上游转录因子c-Myc是否与下游基因RPL34结合,同时采用双荧光素酶报告检测c-Myc与RPL34结合部位。采用实时定量PCR检测RPL34和下游基因e IF3A、e IF3G、e IF3F、UBA52、UBC、FAU等6个互作基因分别在Saos-2和h FOB1.19细胞的表达水平;构建RPL34慢病毒载体,转染Saos-2细胞,采用western blot和实时定量PCR检测RPL34的敲减率以及下游相关基因的表达。结果:1.上游转录因子c-Myc与下游靶基因RPL34的调控机制1.1 Sao-2、U2OS细胞转染p CDNA3.1（+）-c-Myc后,细胞内c-Myc的表达水平显著升高。1.2上游转录因子c-Myc过表达可上调下游靶基因RPL34的表达。1.3过表达转录因子c-Myc可以显著增强基因RPL34的启动子活性。1.4 c-Myc chip产物的检测,RPL34的富集度与LEF1相似。2.RPL34与下游靶基因e IF3的互作机制研究2.1与对照组人成骨细胞h FOB 1.19相比,Saos-2细胞中RPL34、e IF3A、e IF3G、UBA52、UBC、FAU显著上调,而e IF3F显著性下调。2.2 RPL34-sh RNA转染Saos-2细胞后,RPL34表达下降。2.3与NC-sh RNA相比,慢病毒RPL34-sh RNA干扰载体能够显著敲低Saos-2细胞内RPL34基因的表达,与RPL34相关下游基因e IF3A和e IF3F基因表达量显著降低,FAU基因表达量显著升高。结论:1.转录因子c-Myc可以调控基因RPL34启动子的活性。2.c-Myc能够与RPL34的启动子序列结合并调控其表达。3.RPL34可能通过c-MYC/RPL34/e IF3信号轴调控人骨肉瘤增殖。
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