氨甲酰妥布霉素高产菌株的诱变选育

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本文以基因破坏技术获得的阻断安普霉素合成的黑暗链霉菌ToZ-1为出发菌株,通过UV和NTG等诱变剂和诱变条件的考察,确定最佳选育手段,从而筛选到效价高、组分好的优良生产菌株ToZ-1-2。此菌株摇瓶发酵效价比出发菌株提高30%,薄层层析分离组分,产物中主组分为氨甲酰妥布霉素,有少量氨甲酰卡那霉素B,不产生安普霉素。 以此突变株为对象,通过对其遗传稳定性、发酵工艺、培养条件、补料过程的优化考察,结果表明:成熟的斜面孢子在冰箱中存放和斜面传代过程中,效价和组分未有变化,稳定性良好。发酵条件以18小时的种龄、10%的转种量、消泡剂为1.5%豆油、装量40ml的250 ml摇瓶、37℃培养120小时为佳。补料工艺以36小时同时补加葡萄糖和谷氨酰胺为好,而中期补加全料的方式,更有利于发酵产物的积累,发酵总亿提高30%。发酵后期,降低溶氧量,可减缓二次生长速率,延长产物的分泌期,提高发酵产量。 对发酵液的提取与精制,做了初步的尝试,确立组分的提取精制过程中,以强酸性苯乙烯阳离子交换树脂732进行吸附,以强碱性苯乙烯阴离子交换树脂711进行脱色,3%氨水解吸,收集250ml~700ml区间段的解吸液。乙醇结晶样品时,以5倍于结晶液的体积比进行结晶为最好。
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