毛细管电泳技术因为其试剂和样品的消耗量少、分离效率高,同时毛细管又可以作为反应容器,在酶的效价测定、抗氧化活性物质和酶抑制剂的评价和筛选等方面有着广泛的应用。本研究分别开发了抑肽酶效价测定、异黄酮抗氧化活性评价和抑制α-葡萄糖苷酶活性评价的毛细管电泳-紫外检测法。所建立的方法具有简单快速的特点,主要研究内容如下:(1)本研究中,首次建立了通过毛细管电泳-紫外检测来测定抑肽酶效价的新方法。在该方法中使用入口酶反应技术实现了底物、胰蛋白酶和抑肽酶的在线混合,使得酶促反应的发生、底物和产物的分离及检测同时在线进行。在4 min之内实现了抑肽酶效价的测定。研究过程中使用响应面设计系统地优化了胰蛋白酶和底物的孵育条件,在pH 7.6,浓度为17.39 mM的磷酸盐缓冲液、孵育时间为1.40 min的条件下得到了最优的孵育结果。分别在底物、胰蛋白酶和底物以及抑肽酶,胰蛋白酶和底物这三种不同的毛细管电泳系统中评估了该方法的重复性。底物迁移时间和峰面积的相对标准偏差分别小于2.7%和3.1%,产物迁移时间和峰面积的相对标准偏差分别小于2.1%和3.0%。在所建立的测定抑肽酶效价的毛细管电泳-紫外检测法中,推导并建立了新的公式来计算抑肽酶的效价。总之,该方法测定抑肽酶效价时快速方便且环境友好。(2)以β-环糊精为改性剂,建立了快速分离测定6种异黄酮的毛细管电泳新方法,并结合1,1-二苯基-2-三硝基苯肼在线评价其抗氧化活性。研究中以分离度和总迁移时间为响应指标,采用响应面设计系统地优化了硼砂浓度和pH、β-环糊精浓度以及甲醇含量对6种异黄酮分离效果的影响。在运行缓冲液由25 mM硼砂、5 mMβ-环糊精和20%甲醇组成且pH为8.9的条件下,6种异黄酮达到最佳分离,总的迁移时间在8 min内。最后对建立的方法进行了验证并应用于黄芪提取物、黄芪精口服液和黄芪注射液中6种异黄酮的含量测定以及黄芪注射液和黄芪提取物的抗氧化活性评价。(3)采用电泳中介微分析部分填充技术测定了9种异黄酮对α-葡萄糖苷酶的抑制活性,并结合分子对接技术从理论上预测和说明了9种异黄酮与α-葡萄糖苷酶之间的相互作用方式,初步探索了异黄酮结构与抑制α-葡萄糖苷酶活性之间的关系。研究中采用单一轮换法优化了底物对硝基苯酚-α-D-葡萄糖苷与产物对硝基苯酚的分离条件,在pH为8.5、20 mM的硼砂缓冲液和20 kV的分离电压下两者得到了最优的分离。我们还对影响酶促反应条件的各个因素包括:不同区带的进样顺序、孵育缓冲液的浓度、孵育缓冲液的进样长度以及孵育时间进行了优化。在最佳的条件下分别评价了9种异黄酮对α-葡萄糖苷酶的抑制活性,并初步研究了9种异黄酮作为抑制剂在酶促反应前后自身的峰高变化,为抑制剂活性评价的高通量毛细管电泳方法的开发提供了可能。