【摘 要】
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肥胖是许多慢性疾病的重要诱因,威胁人体健康。肥胖人体肠道菌群与正常人体肠道菌群存在差异。据报道一些乳杆菌属细菌能够缓解肥胖引起的病症,改善脂代谢紊乱并具有调节肠道菌群的能力。本论文以大连市益生菌功能特性研究重点实验室保藏的1株Lactobacillus plantarum Y44为研究对象,评价L.plantarum Y44在模拟人胃肠道条件的存活性、在人肠上皮细胞的黏附性、安全性,并探究L.pl
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肥胖是许多慢性疾病的重要诱因,威胁人体健康。肥胖人体肠道菌群与正常人体肠道菌群存在差异。据报道一些乳杆菌属细菌能够缓解肥胖引起的病症,改善脂代谢紊乱并具有调节肠道菌群的能力。本论文以大连市益生菌功能特性研究重点实验室保藏的1株Lactobacillus plantarum Y44为研究对象,评价L.plantarum Y44在模拟人胃肠道条件的存活性、在人肠上皮细胞的黏附性、安全性,并探究L.plantarum Y44对高脂膳食小鼠脂代谢及炎症的影响。L.plantarum Y44在模拟人工胃肠液中的存活率为分别为85.67%及84.31%;分别以脱氧牛黄胆酸钠（TDCA）和脱氧甘氨胆酸钠（GDCA）为底物,发现L.plantarum Y44具有产胆盐水解酶的能力,酶活力分别为0.81 U/m L和1.25 U/m L;黏附于HT-29细胞试验发现,L.plantarum Y44在HT-29细胞上的黏附指数为27±5.23 cfu/cell;L.plantarum Y44不具有溶血性并且不产生生物胺;抗生素敏感性试验显示,L.plantarum Y44对氨苄西林、庆大霉素、卡那霉素、红霉素、克林霉素、四环素、氯霉素均具有敏感性。因此,L.plantarum Y44具有良好的胃肠道耐受及黏附能力,是一株安全的菌株。采用低高两个剂量的L.plantarum Y44（4×10~7 cfu/m L及4×10~9 cfu/m L）灌胃高脂膳食C57BL/6小鼠12周。结果显示,L.plantarum Y44的干预能够缓解高脂膳食小鼠体重的增加并显著降低脏器指数（p＜0.05）;L.plantarum Y44的干预显著降低高脂膳食小鼠血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL-c）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）及天冬氨酸氨基转移酶（AST）的含量,显著增加高密度脂蛋白（HDL-c）的含量（p＜0.05）;同时L.plantarum Y44的干预显著降低高脂膳食小鼠肝脏乙酰辅酶A羧化酶（ACC）及脂肪酸合成酶（FAS）的含量（p＜0.05）;肝脏及附睾脂肪H＆E染色结果显示,L.plantarum Y44能够缓解高脂膳食小鼠肝脏脂肪空泡的产生,并能够减小高脂膳食小鼠附睾脂肪细胞的大小。蛋白免疫印迹试验发现,L.plantarum Y44干预能够显著上调高脂膳食小鼠结肠紧密连接蛋白occludin及claudin-1的表达,下调蛋白p38及phospho-p38的表达（p＜0.05）;同时L.plantarum Y44能够显著降低高脂膳食小鼠血清促炎细胞因子白细胞介素-8（IL-8）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量（p＜0.05）;结肠H＆E染色结果显示,L.plantarum Y44的干预恢复高脂膳食小鼠结肠隐窝的结构并增加杯状细胞的数量。利用GC/MSD气质联用仪测定小鼠粪便短链脂肪酸,并通过16s r DNA扩增子测序测定小鼠肠道菌群。结果发现,L.plantarum Y44的干预不仅增加了高脂膳食小鼠肠道微生物多样性并且增加高脂膳食小鼠与正常小鼠肠道微生物操作分类单元（OTU）组成的相似性;在门水平上,L.plantarum Y44显著降低高脂膳食小鼠厚壁菌门（Firmicutes）与拟杆菌门（Bacteroidetes）的比值及变形菌门（Proteobacteria）的相对丰度（p＜0.05）;在科水平上,L.plantarum Y44显著降低高脂膳食小鼠瘤胃菌科（Ruminococcaceae）,脱硫弧菌科（Desulfovibrionaceae）的相对丰度,增加拟杆菌科（Bacteroidaceae）,Muribaculaceae,乳杆菌科（Lactobacillaceae）及理研菌科（Rikenellaceae）的相对丰度（p＜0.05）;同时,L.plantarum Y44的干预显著增加了高脂膳食小鼠粪便中丙酸、丁酸、异戊酸、戊酸、乙酸的含量（p＜0.05）。综上所述,L.plantarum Y44可能通过调节高脂膳食小鼠肠道菌群,缓解高脂膳食小鼠的肠道炎症;促进高脂膳食小鼠肠道内短链脂肪酸的产生进而缓解高脂膳食小鼠的脂代谢紊乱,并且为相关食品的开发奠定基础。
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