论文部分内容阅读
目的:贲门癌是我国常见的消化道恶性肿瘤之一，具有发病率高、转移迅速、死亡率高等特点。其五年生存率低，严重威胁我国人民健康。贲门腺癌是我国贲门癌的主要病理类型。尽管随着医疗水平的不断发展，包括手术、放疗、化疗及新兴的生物治疗等方法不断完善，但贲门腺癌患者的预后仍不容乐观。研究发现细胞增殖和凋亡是一个动态平衡状态，这个平衡紊乱，肿瘤疾病就有可能发生。抑制细胞凋亡的作用越强，肿瘤预后效果越差、转移越快。
1998年Condorelli等人在研究胰岛素抵抗相关基因的2型糖尿病时发现了凋亡抑制蛋白PED/PEA-15。其参与细胞的信号转导、凋亡、ERK的激活等多种细胞进程。PED/PEA-15以分子构相中的特殊结构域DED与其他含有DED的蛋白（如:TNF-α、TRAIL以及Fas等）结合，抑制“死亡诱导信号复合体(death-inducingsignalcomplex，DISC)”的形成进而阻断caspase的级联激活。Caspase通过细胞内发挥作用，即线粒体途径:促进凋亡的物质，如Bid，与caspase8作用，可释放一种物质，即细胞色素C(cytochrome，cytC)，释放的cytC与某些活化的因子相结Caspase9进而使下游的Caspase3、Caspase6、Caspase7都相应的激活，从而细胞凋亡也就发生。
目前凋亡抑制蛋白PED/PEA-15在贲门腺癌中的表达及其作用尚未见相关报道。本研究通过免疫组化染色SP法和Westernblot法检测人贲门腺癌组织、癌旁组织及人贲门良性病变组织中凋亡抑制蛋白PED/PEA-15的表达，分析其与贲门腺癌临床病理特征的关系及其术后远期生存率的关系，评价凋亡抑制蛋白对人贲门腺癌诊断及术后生存期的评价。
方法:通过应用免疫组化SP法分析人贲门腺癌肿瘤组织与病理证实为阴性的癌旁组织中凋亡抑制蛋白PED/PEA-15的阳性表达水平，以同期贲门良性病变组织作为对照组。标本取自河北医科大学第四医院2005年1月-12月贲门腺癌患者标本64例，术前均未行放化疗并且有较完整的随访记录。其中男性35例，女性29例，年龄在45-75岁之间，平均年龄58.6岁。根据分化程度:低分化21例，高中分化43例;根据贲门腺癌肿瘤浸润深度:T117例T211例，T330例T46例;有淋巴结转移39例，无淋巴结转移25例。根据淋巴结转移个数:0个25例，1个20例。≥2个19例。根据胃癌TNM(2010年)分期标准:Ⅰa-b17例，Ⅱa-b28例，Ⅲa-c19例;根据随访结果，可以按照生存期（＜20月、20月-40月、＞40月）作为研究阶段。贲门良性病变患者标本30例作为对照组。另外通过另一种方法，即Westernblot法标本采集:标本取自河北医科大学第四医院2011年1月-6月贲门腺癌患者标本34例，术前均未行放化疗并且有较完整的随访记录。其中男性26例，女性8例，年龄在50-75岁之间，平均年龄60.8岁。根据肿瘤浸润深度:表浅浸润组10例，深层浸润组24例。根据分化程度:低、中分化23例，高中分化11例;无淋巴结转移11例，有淋巴结转移23例。
结果:
1.免疫组化检测凋亡抑制蛋白PED/PEA-15在贲门腺癌组织、癌旁组织及正常组织中的表达:凋亡抑制蛋白PED/PEA-15在贲门腺癌组织中的表达，其中阳性（以+、++为阳性）表达为75％(48/64)，阴性（以—为阴性）表达为25％(16/64);癌旁组织中的表达，其中阳性表达为56.3％(36/64)，阴性表达为43.7％(28/64);贲门良性病变组织中的表达，其中阳性表达为16.7％(5/30)，阴性表达为83.3％(25/30)。统计学分析显示，三者表达有差异，且差异有显著性(P＜0.05)。
2.凋亡抑制蛋白PED/PEA-15在贲门腺癌组织中与各组生存期的表达关系:凋亡抑制蛋白PED/PEA-15在短期生存组多呈高表达，在长期生存组多呈低表达，且凋亡抑制蛋白PED/PEA-15在各生存组中的表达有显著性差异（P＜0.05）。
3.免疫组化中凋亡抑制蛋白PED/PEA-15在贲门腺癌组织中的表达与临床病理特征的关系:贲门腺癌患者的年龄，性别与凋亡抑制蛋白PED/PEA-15表达无关(P＞0.05);贲门腺癌细胞分化程度、肿瘤浸润深度、淋巴结有无转移、淋巴结转移个数及TNM分期与凋亡抑制蛋白PED/PEA-15表达有密切关系(P＜0.05)。
4.凋亡抑制蛋白PED/PEA-15表达与贲门腺癌术后累计生存率的关系:贲门腺癌患者的远期生存情况与凋亡抑制蛋白PED/PEA-15的表达呈负相关(P＜0.05)，凋亡抑制蛋白PED/PEA-15表达越高，远期生存情况就越差。
5Westernblot检测凋亡抑制蛋白PED/PEA-15在各组织的表达，在癌组织（2.189±0.367）中量显著高于癌旁组织（1.321±0.249）和贲门良性病变粘膜(0.559-0.162)(P＜0.01)，癌旁组织显著高于贲门良性病变粘膜(P＜0.01)。
6Westernblot检测中中低分化组(2.343±0.698)显著高于高分化组（1.782±0.186），且二者之间有统计学意义(P＜0.05);深层浸润组（2.273±0.789）显著高于浅层浸润组(1.565±0.343)二者之间有统计学意义(P＜0.05);但与淋巴结转移、患者年龄及性别无关（P＞0.05）。
结论:
1.免疫组化检测凋亡抑制蛋白PED/PEA-15在贲门腺癌及癌旁组织的表达水平显著高于贲门良性病变组织，说明凋亡抑制蛋白PED/PEA-15的表达水平与贲门病变性质有关。
2.WesternBlot检测凋亡抑制蛋白PED/PEA-15在贲门腺癌及癌旁组织的表达水平显著高于贲门良性病变组织，说明凋亡抑制蛋白PED/PEA-15的表达水平与贲门病变性质有关。
3.免疫组化检测凋亡抑制蛋白PED/PEA-15的表达与贲门腺癌患者的年龄及性别无关;与肿瘤的的分化程度、侵入深度及TNM分期均有密切关系。
4.WesternBlot检测凋亡抑制蛋白PED/PEA-15的表达与贲门腺癌患者的年龄及性别无关;与肿瘤的的分化程度、侵入深度有密切关系。
5.凋亡抑制蛋白PED/PEA-15与贲门腺癌患者术后生存期呈负性相关。远期生存情况长的贲门腺癌患者凋亡抑制蛋白PED/PEA-15表达较低，累计生存率高。远期生存情况短的贲门腺癌患者凋亡抑制蛋白PED/PEA-15表达较高，累计生存率低。凋亡抑制蛋白PED/PEA-15可作为判断贲门腺癌预后的重要指标。
6.凋亡抑制蛋白PED/PEA-15在人贲门腺癌的发生、发展中起着重要的作用，对于凋亡抑制蛋白PED/PEA-15通过作为贲门腺癌靶向治疗新靶点提供理论参考。