朝药板栗叶提取物及其有效成分的抗菌活性研究

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本研究以抗菌活性为导向,意在分离出有良好抗菌活性的单体化合物,为民族药发展提供理论依据。板栗叶(CastaneamollissimaLeaf)为壳斗科植物(Ulmaceae)板栗(Castanea mollisima)的叶,属于朝药中的太阴人药。板栗叶具有抗菌、抗氧化和细胞保护等生物活性。本实验以变形链球菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌为活性追踪,采用60%乙醇冷浸法对板栗叶中的化学成分进行了初步提取,得到的粗提取物分别用石油醚、乙酸乙酯萃取,利用正、反相硅胶、中压制备液相色谱仪和高压制备液相色谱仪等分离方法对板栗叶石油醚萃取物和乙酸乙酯萃取物进行分离和纯化得到50个单体化合物,采用1H-NMR、13C-NMR、lH-1HCOSY、HMQC、H MBC和HR-ESI-MSD等波普技术对分离得到的化合物进行结构鉴定。经过结构分析,最终鉴定了 19种化合物,分别为β-谷甾醇(1)、胡萝卜苷(2)、7α-羟基谷甾醇(3a)、7β-羟基谷甾醇(3b)、αα-生育酚(5)、γ-(6Z,9 Z,12Z)亚麻酸乙酯(6)、单棕榈酸甘油酯(7)、(7S,7’S,8R,8’S)-4,4’-dihydrox y-3,3’-dimethoxy-7,7’-epoxylignan(8)、软木三萜酮(9)、海棠果醛(10)、坡模醇酸(11)、常春藤皂苷元(12)、3β3,23-dihydroxy-1-oxo-olean-12-en-28-o ic(13)、乌苏酸内酯(14)、野鸦椿酸(15)、2α-羟基白桦脂酸(16)、1α,3β-dihydroxyl-olean-12-en-28-oic acid(17)、山楂酸(18)、fouquierol(19)。19个化合物均从板栗叶中首次分离得到,其中化合物2~11、13~17、19为板栗属中首次分离得到。对化合物采用双倍稀释法进行抗菌活性测试,结果显示,化合物6、7、11、12、13、15、17和18表现出抑菌作用,从MIC结果显示,化合物11、12、17和18有明显的抗菌活性。其中化合物12对大部分革兰氏阳性菌有抑制作用,对503(金黄色葡萄球菌)和7535(白色念珠菌)的最小抑菌浓度(MIC)分别为16μg/mL和64μg/mL。化合物18对耐药菌3505(耐喹诺酮金黄色葡萄球菌)、3519(耐喹诺酮金黄色葡萄球菌)和革兰氏阳性菌1924(大肠杆菌)有抑制作用,MIC值分别为32μg/mL、64μg/mL和32μg/mL。化合物17对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌以及耐药菌都有抑制作用,对革兰氏阳性菌4220(金黄色葡萄球菌)的MIC值为64μg/mL。MBC值普遍小于4MIC,表明对细菌不易产生耐药性。化合物7、12、13、18对细菌的抗菌活性均为首次报道。
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