湿性猫传染性腹膜炎病例分析和病毒S、3c、N基因分子特征研究

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猫传染性腹膜炎(Feline infectious peritonitis,FIP)是猫科动物的一种致死性的疾病,也是目前导致猫死亡的主要疫病之一。该病主要感染1岁以下的幼猫或者老年猫,并且在多猫家庭呈高发态势,这不仅给个人,也给整个宠物养殖业造成了巨大的危害。因此,本研究以成都地区10例FIP确诊的阳性病例作为研究对象,对其临床症状、临床诊断进行归纳,同时对病毒的S、3c、N基因全长CDS进行扩增、测序和序列分析,旨在为湿性FIP的临床诊断和实验室诊断提供更多的数据参考和依据。1.10例湿性FIP病例分析为了进一步丰富与完善FIP的临床资料,能为以后临床诊断、实验室诊断和治疗提供依据。本研究从成都市2家宠物医院2021年前来就诊近100例疑似病例(根据临床症状、检测指标)收集出10例临床症状典型且高度相似的病例,对其发病时猫的品种、年龄、性别、临床症状、血液生化指标分析、B超与DR检查结果、渗出液分析、实时荧光反转录聚合酶链式反应结果进行综合分析,对阳性病例(FCoV RT-qPCR结果呈阳性,病毒S基因检测出现突变)治疗方法和效果进行了客观评价。结果表明,10例患猫中4例为英国短尾猫、3例为中华田园猫,其他3例分别为美国短尾猫、布偶猫与暹罗猫,年龄均为1岁龄内,5公5母;临床症状均伴随着精神沉郁、嗜睡、厌食,同时患猫体温、心率、呼吸都有不同程度的升高;血常规检查红细胞、红细胞比容、平均红细胞体积浓度水平均很低,显示严重贫血;总蛋白含量、丙氨酸氨基转移酶(alanine transaminase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate amino transferase,AST)会出现上升,显示体内出现很重炎症并伴随肝脏损伤;猫血清淀粉样蛋白A(serum amyloid A,SAA)值高于正常值(0-4.9)8倍到20倍,显示病毒感染;白球比均低于0.4,临床高度怀疑FIP;影像学检查(B超检查跟DR检查)可以有效观察出患猫体内存在腹水;抽取腹水进行李凡他实验、冠状病毒RT-qPCR结果均呈阳性。10例病例中,7例使用GS-441524治疗,皮下注射,4mg/kg/次,一日一次,最长持续治疗12周后,6例痊愈,1例死亡。2.FIPV的S、3c、N基因克隆与序列分析为了进一步研究FIP病毒的分子特征,从上述10例病例腹水中提取RNA,并将其逆转录成cDNA,分别针对FIP病毒的S基因、3c基因、N基因设计引物,对其完整CDS全长进行PCR扩增、克隆和测序,并分析同源性和遗传进化关系结果,从5个毒株中扩增出完整的S基因CDS全长,从7个毒株中扩增出3c基因CDS全长,从所有10个毒株中扩增出N基因CDS全长。序列分析表明,与普通FECV相比,S基因在多个位点有突变,其中所有毒株在23531和23537位点上发生突变一致,分别由A突变为T或者C,以及由T突变为G;3c基因相较于普通FECV其长度均变小,且同样多个位点发生不同程度突变;N基因的突变则较小。对S、3c、N基因构建遗传进化树,发现本研究中S基因、3c基因所有临床毒株与FIPV聚为一支,而FECV聚为另一大支,说明S基因、3c基因在FIPV和FECV之间存在明显差异,可用于对FIPV的鉴定。本研究对10例湿性FIP病例分析,进一步明确了FIP的临床症状、血常规检查结果、血生化检查结果、B超、DR检查结果和治疗效果,对腹水中的FIPV进行扩增测序,分析病毒基因分子特征,从而为FIP的诊断和治疗提供了进一步的参考和依据。
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