高F值寡肽作为具有生理功能的活性肽,深受食品和医药界的高度关注,被认为是开发保健食品的优质肽源。本试验选取杏鲍菇为原材料制备高F值寡肽,先用超声波破碎辅助蜗牛酶水解杏鲍菇子实体细胞壁,采用碱提酸沉法提取蛋白质,再通过双酶分步水解,制备寡肽液;然后采用活性炭吸附脱除芳香氨基酸,用超滤膜过滤,通过孔径的小分子肽液选取大孔树脂进行脱盐处理,以Sephadex G-15凝胶过滤层析分离得到符合寡肽分子范围的肽液。经氨基酸分析仪分析,证明制备得到的该肽液属于高F值寡肽。取得的主要研究结果如下:1.确立了基于超声破碎-蜗牛酶酶解法提取杏鲍菇子实体蛋白质的工艺及参数。超声破碎条件经过单因素优化为:超声功率300 W、超声时间26 min、水料比1.95:5(mL/g);蜗牛酶最佳酶解条件为:温度40℃、pH 5.0、酶用量7%、时间1.5 h,此条件下杏鲍菇子实体蛋白提取率达到了72.82%;再运用BP神经网络模型在正交试验的基础上仿真计算出更精确的酶解条件为温度42.8℃、pH 4.8、酶用量7%、时间1.5 h,其真实提取率为75.92%,相比正交试验结果提高了4%;相较热水碱提高了33.35%。同时,超声破碎辅助酶解提取时间缩短了约30 min,碱液浓度也有所下降。2.筛选出了双酶分步水解的酶源种类,并优化获得了适宜的水解条件。蛋白液通过双酶水解得到多肽混合液,以水解度为指标筛选出最佳内肽酶为碱性蛋白酶,最佳外肽酶为风味蛋白酶;碱性蛋白酶经过优化的水解条件为:酶用量4.21%、pH 11.08、温度51.1℃,在此条件下,得到菌体蛋白液水解度为23.78%;风味蛋白酶经过优化的水解条件为:酶用量4.27%、pH 7.04、温度50.95℃,在此条件下,得到菌体蛋白液的水解度为39.67%;随后进行双酶复合水解,多肽液pH调节至9,对两种水解方法进行比较,得出复合水解比分步水解所用的时间缩短了近60 min,但前者比后者的水解度低了约10%,为了更好地制备高F值寡肽,选择分步水解的方式。3.筛选出最佳活性炭的型号,并优化了活性炭吸附脱除芳香氨基酸的最佳条件。用活性炭将内外肽酶水解后的多肽液进行脱芳处理,以支链氨基酸保留率、芳香族氨基酸去除率和OD比为指标,筛选出最佳活性炭的型号为XHT-150。随后采用Box-Benhnken(BBD)试验设计优化了最佳脱芳条件:脱芳时间3.1/h、pH 4.25、固料比1:9.77,在此条件下,模型预测的OD比值理论比值为26.51。在该条件下,进行验证试验,得到产品的OD比值为25.97。最后将脱芳处理的多肽液上氨基酸分析仪进行分析,测得芳香族氨基酸的含量只占总的氨基酸含量的0.15%,而支链氨基酸的含量达到了总氨基酸含量的30.27%。将芳香族氨基酸和支链氨基酸的含量进行比较得到F值为30.34,已达到高F值寡肽的要求。4.筛选了大孔树脂进行脱盐处理的工艺参数。以膜通量为指标用孔径6000 D的超滤膜进行超滤,得到最佳压力为0.25 Mpa。通过滤膜的浓缩液进行了大孔树脂的脱盐处理,静态吸附条件下筛选出了最佳大孔树脂型号为DA201-C,静态吸附环境下最佳吸附条件为:pH 4、时间60 min,洗脱液浓度为75%乙醇,洗脱时间为120 min。动态吸附环境下最佳进样流速为200 mL/h,洗脱流速为50 mL/h,洗脱120 min,最后得到的多肽回收率为79.68%。5.明确了采用凝胶层析分离法获得符合寡肽分子范围肽液的工艺条件。对大孔树脂吸附后的多肽液采用Sephadex G-15凝胶层析分离,根据标准品的出峰时间分离出了符合寡肽分子范围的肽液,确定了100-120 min之间的寡肽液在A220nm的吸光值明显高于A280nm的吸光值,由此初步判断肽液中BCAA的含量高于AAA的含量,将此寡肽液进行氨基酸分析,最后计算此寡肽液四个组分中F值最高达到了34.78,比脱芳处理后的F值高了14.63%,表明柱层析对BCAA有富集作用。