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研究背景:在恶性肿瘤中,肺癌的发病率及死亡率高居榜首,而肺癌治疗费用高,病人生活质量低,加重了社会经济负担。随着医学科学技术的进步,诊断方法有所提高,不断有新化疗药物、靶向药物以及生物制剂面世,诊断流程逐渐规范有序,综合治疗越来越广泛。但由于环境的变化、个体差异、基因变异以及耐药等因素,仍存在早期诊断不足致使错失最佳手术机会的现象。因此,目前肺癌治疗仍以化疗为主,而耐药成为影响化疗效果中最重要的因素。所以,从多方面寻找影响化疗耐药原因迫在眉睫。人乳头瘤病毒(Human Papillomavirus,HPV)第一次发现是与宫颈癌密切相关,目前已证实为宫颈癌致癌因素。随着研究的不断深入,在呼吸系统、消化系统、泌尿系统及生殖系统中均发现了其存在,并且有实验结果显示其在肿瘤的发生、发展、治疗效果中发挥了一定的作用。但目前高危型HPV16/18在肺腺癌中对化疗药物敏感性的研究尚少。目的:1、分析临床肺腺癌组织及癌旁组织中高危型HPV16/18 E6蛋白的阳性表达情况,以及与临床特征的相关性。2、利用高表达重组质粒HPV16E6-pEGFP-N1转染肺腺癌A549细胞作为实验组(E6组)、与之对应的空载质粒转染肺腺癌A549细胞作为对照组(Ctl组)及不予任何处理肺腺癌A549细胞作为空白组(A549组),探讨高危型HPV16 E6蛋白对腺癌A549细胞的化疗药物顺铂药物耐药性的影响。3、分析E6组、Ctl组、A549组中E6、p53、HIF-1α三种蛋白的表达差异,初步探讨高危型HPV16 E6蛋白影响肺腺癌化疗药物耐药性的机制,以期为增强肺腺癌化疗药物敏感性,改善化疗效果提供新思路。方法:1、收集成都医学院第一附属医院60例经临床病理确诊的肺腺癌组织及对应的癌旁组织,采用免疫组化分析高危型HPV16E6蛋白、HPV18E6蛋白在肺腺癌和癌旁组织中的表达情况,通过χ~2检验分析高危型HPV16/18E6蛋白阳性表达与肺腺癌患者临床特征的相关性。2、通过重组质粒高表达HPV16E6-pEGFP-N1转染肺腺癌A549细胞作为实验组(E6组)、相对应的空载质粒转染A549细胞组为对照组(Ctl组)及不予任何处理的A549细胞作为空白组,显微镜下观察表达情况,Western blot检测转染细胞蛋白表达效率以验证目标质粒过表达成功,再筛选稳定高表达细胞株,建立HPV16E6高表达的A549细胞株用于后续实验。3、E6组、Ctl组、A549组细胞给予相同浓度梯度的顺铂在相同条件下培养48小时后,通过MTT法检测E6组、Ctl组、A549组细胞的在波长为490nm处的吸光度值,分别计算出顺铂对三组肺腺癌细胞的抑制率及IC50值,分析HPV16E6表达差异对顺铂耐药性的影响。4、采用Western blot检测E6组、Ctl组、A549组细胞中E6、p53、HIF-1α蛋白表达的差异,初步探讨高危型HPV16 E6蛋白对肺腺癌化疗药顺铂耐药性影响的机制。结果:1、高危型HPV16/18E6在肺腺癌中阳性表达率为48.3%(n=29),在癌旁组织中阳性表达率为18.3%(n=11),在肺腺癌组织中阳性表达率明显高于癌旁组织,且在患者性别、年龄、吸烟史、TNM分期及肿瘤大小中表达无明显差异。2、E6组肺腺癌细胞抑制率低于Ctl组、A549组,E6组肺腺癌细胞IC50值高于Ctl组、A549组,差异有统计学意义(P<0.05);且Ctl组与A549组比较抑制率和IC50差异无统计学意义(P>0.05)。3、E6组、Ctl组、A549组肺腺癌细胞中E6、p53、HIF-1α蛋白表达存在差异,E6组中E6、HIF-1α蛋白表达高于Ctl组、A549组,而p53蛋白表达低于Ctl组、A549组,差异均有统计学意义(P<0.05);Ctl组和A549组中E6、p53、HIF-1α蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1、高危型HPV16/18 E6蛋白在肺腺癌中表达量明显高于癌旁组织,且与患者性别、年龄、吸烟、TNM分期及肿瘤大小及等临床特征无关(P>0.05)。提示高危型HPV16/18E6蛋白可能在肺腺癌中发挥了一定作用,为进一步研究高危型HPV16/18E6蛋白在肺腺癌中的作用提供实验基础。2、HPV16E6过表达组化疗药物抑制率降低,IC50值增大,对化疗药的敏感性降低,耐药性增加(P<0.05)。3、HPV16E6过表达组中E6、HIF-1α蛋白高表达,而p53蛋白低表达,提示高危型HPV16/18对肺腺癌化疗药物敏感性的影响机制可能为:E6抑制了p53表达,间接促进HIF-1α的表达。其具体机制仍待进一步研究。