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本文对辛格粒毛盘菌YM296胞内黑色素的发酵提取、分离纯化、结构特征、氨基酸修饰、抗衰老活性及抗肿瘤活性进行了研究,主要结果如下: 采用微波辅助提取法提取辛格粒毛盘菌YM296胞内黑色素(LIM),并在单因素实验的基础上,采用Box-Behnken试验设计获得微波辅助法的最佳提取条件为:NaOH溶液浓度1.05mol/L、料液比1:14.72(g:mL)、微波时间118.70s、微波功率320W。在此条件下,LIM得率为11.08％,较碱溶酸沉法提高了40.43%,表明微波辅助提取法可提高LIM的得率,且其提取时间较短。 采用葡聚糖G-15凝胶柱对LIM进行分级分离,获得三种均一性组分LIM-a、LIM-b、LIM-c,其中LIM-a为主要组分,其含量占均一性组分总量的75.7%。紫外可见吸收光谱显示LIM-a在215nm处具有最大吸收峰,经元素分析及质谱分析推断LIM-a分子式为C26H14N2O7S2,为棕黑色素;并结合红外光谱、热解/GC/MS及核磁共振分析,推断出其可能结构式。 于颈背部皮下注射D-半乳糖建立衰老小鼠模型,经灌胃不同剂量的LIM-a后,发现LIM-a能显著提高衰老小鼠的体重和免疫器官指数,有效提高衰老小鼠肝脏、脑匀浆及血清中的SOD、GSH-PX、CAT活性,并降低MDA含量,表明LIM-a具有较强的抗衰老活性。 采用组氨酸、赖氨酸及精氨酸对非水溶性LIM-a进行修饰,发现修饰后的黑色素在水中的溶解度较LIM-a均有不同程度的提高,其中组氨酸-黑色素(HLIM-a)溶解度最高,室温下在蒸馏水中的溶解度为4.77g/100g。质谱显示HLIM-a含有二种组氨酸-黑色素分子,它们分别是LIM-a分子分别与1、2个组氨酸分子结合形成的。红外光谱显示HLIM-a在1659cm-1和1636cm-1处具有黑色素的羰基与组氨酸的氨基结合的酰胺基团特征吸收峰。核磁共振氢谱显示 HLIM-a在1.0-1.5ppm范围内出现信号峰,这是由组氨酸主链上-CH2基团引起的。抗肿瘤实验结果表明,LIM-a能显著提高H22荷瘤小鼠的摄食量、体重、抑瘤率、胸腺指数和脾脏指数,有效提高SOD、IL-2和TNF-α的水平,降低MDA含量,表明LIM-a具有明显的抗肿瘤活性。与LIM-a相比,相同剂量的HLIM-a抗肿瘤活性更显著。