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随着有机氯农药的全面禁用,有机磷农药因其低残留、易水解的特性而被广泛使用。但有机磷农药在食物中特别是在蔬菜中的残留对人类健康的潜在危害引起了人们的广泛关注。农药残留常用的检测方法为色谱法,质谱法以及波谱法等,其中气相色谱法是国标法,但该法耗时长、成本高、不适合现场检测。因此,建立一套简便、快速、准确、能在农产品生产和流通各环节现场检测的农药残留检测方法已成为急待解决的问题。酶抑制法正是一种快速检测法。生态毒理学的研究表明,有机磷农药的毒性作用主要是由于动物乙酰胆碱酯酶(AChE)的活性受到抑制,而且在一定的浓度范围内,有机磷农药与AChE的活性之间存在良好的剂量一效应关系,这是酶抑制法快速检测有机磷农药的理论基础。在前人研究的基础上,本文对农药残留快速检测方法—抑制法进行了研究。本文主要研究内容及结果如下:1.本文对鲫鱼AChE提取条件和酶活测定条件进行了优化。鲫鱼AChE最佳提取条件为:pH为7.5,匀浆比为1:4,提取液为磷酸盐缓冲液。鱼脑AChE酶活测定的最佳条件为保温时间35min,保温温度32℃,pH值7.6。肝脏AChE酶活测定的最佳条件为保温时间28min,保温温度30℃,pH值7.6。肌肉AChE酶活测定的最佳条件为保温时间31min,保温温度31℃,pH值7.6。2.鲫鱼脑AChE的米氏常数为0.548mmol/L,肝脏AChE的米氏常数为0.406mmo/L,肌肉AChE的米氏常数为1.75mmol/L。结果表明鲫鱼AChE对底物的亲和力较强。3.敌敌畏对鱼脑、肌肉和肝脏AChE的半数抑制浓度分别为1.70μg/mL、3.55μg/mL、4.52μg/mL,双分子速率常数分别为7.40×10~3mol/L·min、7.21×10~3mol/L·min、5.94×10~3mol/L·min;辛硫磷对鱼脑、肌肉和肝脏AChE的半数抑制浓度分别为2.45μg/mL、4.05μg/mL、9.46μg/mL,双分子速率常数分别为10.54×10~3mol/L·min、10.11×10~3mol/L·min、8.32×10~3mol/L·min:毒死蜱对鱼脑、肌肉和肝脏AChE的半数抑制浓度分别为10.89μg/mL、14.33μg/mL、17.00μg/mL,双分子速率常数分别为7.81×10~3mol/L·min、6.85×10~3mol/L·min、4.99×10~3mol/L·min。对于敌敌畏、辛硫磷和毒死蜱这三种有机磷农药而言,鲫鱼体内不同部位AChE对其敏感性顺序为鱼脑AChE＞肌肉AChE＞肝脏AChE。4.鲫鱼脑AChE经双水相萃取,DEAE-Sephadex A-50离子交换层析和SephadexG-200凝胶过滤层析后,其酶活由原来的32.14μmol/min·g增大到8786.35μmol/min·g,纯化273.4倍,回收率为10.6%。5.用酶抑制法对白菜、青椒、西红柿、豆角和空心菜中有机磷或(和)氨基甲酸酯农药残留情况进行检测,结果其对AChE酶活抑制率均在35%以下,说明被检测样品中有机磷或(和)氨基甲酸酯农药均未超标。