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心血管疾病已经成为世界上导致死亡的主要原因之一。急性心肌梗死是心血管疾病中最常见的一种,是心血管疾病中主要死亡原因之一。心肌梗死会导致心肌缺血,如不及时治疗,心肌缺血将会造成严重的心肌损伤和心脏功能障碍,甚至于猝死。但是目前尚缺乏有效的防治手段。因此,研究急性心肌损伤的发病原因和有效的防治手段已经成为了全世界关注的热门问题之一。异丙肾上腺素(Isoproterenol,ISO)是儿茶酚胺类的β受体阻断剂,在大剂量注射后可引起动物的急性心肌损伤,这类似于人类由于心肌缺血引起心肌梗死后的急性心肌损伤,因此成为本实验造模的基础。尖叶假龙胆(Gentianella acuta(Michx.)Hulten,Gentianella acuta,G.)是龙胆科假龙胆属的植物,主要分布于河北,、东北,、山西,、内蒙和山东等地区,在蒙、藏医学中尖叶假龙胆常用于治疗黄疸型肝炎、头痛、发烧等,而内蒙古地区鄂温克族长期用其泡茶饮用发现尖叶假龙胆对心脏有重要的保护作用。但是,尖叶假龙胆是否能有效防治心肌损伤及其作用机制尚未明确。因此本实验选择ISO诱导的急性心肌损伤模型去探讨尖叶假龙胆对心肌损伤的保护作用。本实验主要研究尖叶假龙胆对ISO诱导的大鼠的急性心肌损伤的保护作用,并探讨TLR4/NF-кB信号通路在尖叶假龙胆保护心肌损伤过程中的作用。目的:研究尖叶假龙胆对ISO诱导急性心肌损伤的保护作用。通过对心脏功能,血清中指标,心肌组织病理学改变的检测,判断尖叶假龙胆对心肌损伤的保护作用。利用免疫组化与分子生物学技术检测核转录因子p65(NF-κB-p65)和Toll样受体4(TLR4)的表达水平等指标,探讨尖叶假龙胆保护心肌急性损伤的潜在作用机制。方法:清洁级雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠随机分成5组(n=9),分别是:空白组(Con)、模型组(ISO)、低剂量组(ISO+G.0.3 g/kg)、中剂量组(ISO+G.0.6 g/kg)、高剂量组(ISO+G.1.2 g/kg)。低剂量组、中剂量组、高剂量组分别给予不同剂量浓度(0.3 g/kg,0.6 g/kg,1.2 g/kg)的尖叶假龙胆灌胃,持续28天,空白组和模型组给予等体积生理盐水灌胃。模型组和不同剂量药物干预组在灌胃结束后连续2天皮下注射异丙肾上腺素(85 mg/kg,每日一次),建立心肌急性损伤动物模型。实验过程中,每周记录大鼠的体重。末次注射ISO后禁食24 h,麻醉,测定心电图,随后处死大鼠,取血,分离心脏和左心室并称重,计算心重指数(HWI),左心室重量指数(LVWI)。取左心室心尖部一部分于4%的多聚甲醛中固定,其余部分组织保存于-80℃冰箱中。采用生物化学技术检测血清标本中CK、LDH、AST的活性和TNF-α、IL-6的含量。对左心室组织进行HE染色和Masson染色。利用免疫组化方法和western blot方法测定左心室组织TLR4和NF-κB-p65的蛋白表达水平。用RT-PCR方法测定左心室组织TLR4和NF-κB-p65的m RNA的表达变化。结果:1尖叶假龙胆对ISO诱导急性心肌损伤大鼠心重指数和左心室指数的影响模型组大鼠的心重指数和左心室指数相比于空白组,有明显升高(P<0.01)。不同剂量的药物干预组与模型组比较无明显差异(P>0.01)。2尖叶假龙胆对ISO诱导急性心肌损伤大鼠心电图的影响与空白组相比,模型组ST段明显抬高,与模型组相比,不同剂量的药物干预组的心电图ST段均有所下降,且有剂量依赖性。结果表明,尖叶假龙胆可有效改善ISO诱导的大鼠急性心肌损伤。3尖叶假龙胆对ISO诱导急性心肌损伤大鼠血清酶CK、LDH、AST活性的影响本实验对三种急性心脏损伤的标志性血清酶(CK、LDH、AST)进行了检测和统计。结果显示,模型组血清AST的活性比空白组有明显的升高(P<0.01)。低剂量组血清AST的活性与模型组无差异,中剂量组血清AST活性相比模型组明显下降(P<0.05),高剂量组血清AST相比于模型组显著降低(P<0.01)。模型组血清CK的活性相比于空白组具有明显的升高(P<0.01)。低、中、高剂量组血清CK的活性相比于模型组均有显著降低(P<0.01)。模型组LDH的活性相比于空白组具有明显的升高(P<0.01),低剂量组LDH的活性与模型组相比无明显差异,中、高剂量组均有显著降低(P<0.01)。4尖叶假龙胆对ISO诱导急性心肌损伤大鼠血清中TNF-α和IL-6含量的影响放免法检测血清中TNF-α和IL-6的含量,对比发现,模型组的TNF-α水平比空白组有显著升高(P<0.01),低、中、高剂量组均显著降低(P<0.01),三组之间无明显差异。模型组IL-6的含量比空白组有显著升高(P<0.05),低、中、高剂量组显著降低(P<0.05),三组之间无明显差异。5尖叶假龙胆对ISO诱导急性心肌损伤大鼠心肌病理学改变的影响HE染色结果显示,与空白组相比,模型组心肌组织坏死严重,呈现出大范围的心肌坏死,局部玻璃样病变,伴有胶原增多,炎症细胞浸润,细胞结构不完整。低剂量组呈现出明显的心肌坏死,与模型组比较无显著改变。中、高剂量组心肌坏死程度和范围明显降低,炎症细胞浸润明显减轻。马松染色的结果显示,胶原被染成绿色。与空白组比较,模型组表现出较多的胶原沉积,低、中、高剂量组只出现较少的胶原沉积。结果表明,尖叶假龙胆能降低ISO诱导的急性心肌组织坏死,减轻急性心肌梗死后炎症反应和胶原沉积。6尖叶假龙胆对ISO诱导急性心肌损伤大鼠心脏中TLR4和NF-κB-p65蛋白和m RNA表达的影响。免疫组化染色结果显示,在正常心肌组织中TLR4和NF-κB-p65呈现出低表达,在模型组TLR4和NF-κB-p65的表达水平明显升高,尖叶假龙胆低、中、高剂量组TLR4和NF-κB-p65表达水平相比于模型组均有不同程度的下降。Western blot结果显示,空白组TLR4和NF-κB-p65的蛋白表达量较少,模型组蛋白表达明显增加,而低、中、高剂量的尖叶假龙胆均可使TLR4和NF-κB-p65的蛋白表达量明显下降。RT-PCR结果显示,与空白组相比,模型组TLR4、NF-κB-p65 m RNA表达增加。尖叶假龙胆低、中、高剂量组均可以减弱ISO诱导的TLR4、NF-κB-p65 m RNA的表达水平。结论:尖叶假龙胆对异丙肾上腺素诱导的大鼠急性心肌损伤具有保护作用,机制可能与抑制TLR4/NF-кB信号通路,减弱炎症因子表达有关。