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目的：建立大、小鼠血瘀合并脑缺血耐受动物模型,观察毛冬青总皂苷和毛冬青总黄酮对血瘀合并脑缺血耐受动物模型的影响,探讨毛冬青总皂苷和毛冬青总黄酮的活血化瘀作用及提高血瘀合并脑缺血耐受动物模型的脑保护作用。
方法：1.采用地塞米松0.8mg/kg后腿肌肉注射15d造成小鼠血瘀模型,同时给予相应药物。采用两次阻断双侧颈总动脉血流的方法,建立小鼠脑缺血耐受模型,第一次手术后,华佗再造丸组与尼莫地平组,毛冬青总皂苷和总黄酮大、中、小剂量组分别给予相应的药物灌胃,假手术组、预处理模型组与缺血再灌注组同时给予同体积生理盐水灌胃,每日1次,连续给药5d。于第二次手术后24h,测定全血粘度、ATP酶(ATPase)活力、一氧化氮合酶(NOS)活力、谷氨酸(Glu)浓度,HE染色观察脑组织形态学变化。
2.采用地塞米松0.2mg/kg后腿肌肉注射10d造成大鼠血瘀模型,同时给予相应药物。采用阻断双侧颈总动脉血流,再采用线栓法阻塞左侧大脑中动脉,建立大鼠全脑-局灶脑缺血耐受模型。第一次手术后,金纳多组与毛冬青总皂苷和黄酮大、中、小剂量组分别给予相应的药物灌胃,假手术组、预处理模型组与缺血再灌注组同时给予同体积生理盐水灌胃,每日 1次,连续给药4d。于第二次手术后24h,测定大鼠的全血黏度和血浆黏度以及脑组织中 ATPase、超氧化物歧化酶(SOD)活性,通过蛋白调往调亡蛋白 Bax、抗凋亡蛋白 Bcl-2 免疫组化染色和HE染色,观察脑组织形态学变化。
结果：1.对血瘀合并脑缺血耐受小鼠模型的影响：小鼠血瘀合并脑缺血耐受模型复制成功,预处理模型组及缺血再灌注组动物全血粘度明显升高、ATPase活性降低、Glu浓度和NOS活性增加；与缺血再灌注组动物相比,预处理模型组动物全血流变值升高,脑组织中 NOS活性降低,谷氨酸(Glu)生成减少,ATP酶(ATPase)活力增强,且动物脑组织的病理损伤程度明显减轻。与模型组比较,毛冬青总皂苷和毛冬青总黄酮能显著或明显改善血瘀小鼠的全血粘度,增强ATPase 活力,减少 Glu 的生成,降低 NOS 的活力,对脑神经细胞损伤有明显的保护作用,与毛冬青总皂苷比较,毛冬青总黄酮对脑细胞的保护作用更明显。
2.对血瘀合并脑缺血耐受大鼠模型的影响：大鼠血瘀合并脑缺血耐受模型复制成功,模型组动物及缺血再灌注全血粘度明显升高、ATPase活性降低、T-SOD活力显著下降、Bax 阳性细胞表达显著增加；与缺血损伤组比较,缺血耐受组动物全血流变值升高,超氧化物歧化酶(SOD)、ATP 酶(ATPase)活力增强,动物脑组织的病理损伤程度明显减轻。与模型组比较,毛冬青总皂苷和毛冬青总黄酮能明显或显著改善血瘀大鼠的全血粘度,显著或明显增强ATPase、T-SOD活力和 Bcl-2 阳性细胞的表达,对脑神经细胞的损伤有明显的保护作用,与毛冬青总皂苷比较,毛冬青总黄酮对脑细胞的保护作用更明显。
结论：缺血预处理可诱导脑缺血耐受作用,抑制NOS的活性和Glu的过量表达,增强脑细胞的抗氧化性及能量代谢,以及增强 Bcl-2表达,降低 Bax 表达是其部分机制；毛冬青总皂苷和毛冬青总黄酮可通过改善血液流变性,抑制血小板聚集,抑制NOS的活性和Glu的过量表达,增强脑细胞的抗氧化性及能量代谢,以及增强Bcl-2表达等途径,与缺血预处理具有协同作用,减轻再缺血后脑损伤,促进脑缺血耐受的形成。