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牛传染性鼻气管炎(InfectiousBovineRhinotracheitis,IBR),又称“红鼻病”和“坏死性鼻炎”。由牛疱疹病毒Ⅰ型(Bo vine herpesvirus 1,BoHV-1)一牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious Bovine Rhinotracheitis virus,IBRV),引发牛的一种急性、热性、接触性疫病,主要引起病牛发热、呼吸困难、鼻炎、鼻窦炎和上呼吸道炎症等,是导致牛养殖业经济损失的一个主要原因。目前,我国养牛业正向规模化、集约化迅速发展,国内外活畜和遗传物质贸易日益频繁,这给IBR的流行与传播创造了良好条件。而且我国还没有市场化疫苗,也未实施监测和控制计划。目前已知绝大多数流行病学报道都是检测血清IBRV抗体,现有资料表明该病在我国已呈现高度蔓延趋势,我国养牛业已遭受极大损失,因此研究该病病原检测技术和方法,加强病原控制有着非常重要的意义。目前,我国基层牛场由于实验室的条件限制,调查该病病原的流行情况往往不能及时进行。本研究旨在建立针对病原IBRV的简便快速的现场检测方法,利用该方法能够对病原流行状况做现场分析。本研究内容由两个部分组成:第一部分:基于颜色判断的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)快速检测 IBRV 研究为创建一种检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的LAMP可视化方法,根据已发表的IBRV gB基因序列,设计合成了 3对扩增IBRV gB基因靶序列的特异性引物,并优化了 LAMP反应溶液组分,成功创建了 IBRV的LAMP可视化检测法,验证了其敏感性、特异性以及对临床样品的检测情况。结果表明,该法可在50min内检测出10copies的标准阳性质粒,且不发生交叉反应,通过肉眼直接观察即可判断结果。检测临床样品发现,被检奶牛场IBRV感染严重:鼻拭子样品中IBRV的阳性率介于79.4%-95.7%,总阳性率为84.4%;血清样品中IBRV的阳性率介于48.2%-69.4%,总阳性率为56.5%。该方法的建立为基层现场检测IBRV提供了便利,也为快速检测试剂盒的开发奠定了基础。第二部分:牛传染性鼻气管炎的流行病学调查为了验证上海市崇明岛奶牛场IBR的流行情况和进行流行病学调查分析,采用套式PCR方法分别对两个奶牛场的鼻拭子样品及血清样品进行IBR病原检测。结果显示,鼻拭子样品中IBRV的阳性率介于77.5%-96.7%,总阳性率为83.4%;血清样品中IBRV的阳性率介于50.0%-52.8%,总阳性率为51.1%。与LAMP法检测的结果相比发现,两检测方法符合率高(总符合率为92.4%);卡方检验(McNemar检验)表明,两法对样品中IBRV的检出率差异不显著,证明了 LAMP检测法的可靠性。病原学分析表明:本研究所扩得序列BHV-1/SH309与巴西毒株IBR 6813(DQ006851),BH81(DQ006854),LD30/2(DQ006855),LD15(AY758382)以及AY330349的同源性在97.8%以上;进化树分析表明:BHV-1/SH309与毒株IBR 6813(DQ006851),BH81(DQ006854),LD30/2(DQ006855)及 LD15(AY758382)在同一分支。这为制定崇明岛奶牛场的综合防控办法提供了理论支持,需要引起有关部门的高度重视,制定新的防控措施显得尤为关键