C57BL/6小鼠全脑缺血再灌注后脑组织内外周蛋白的表达变化

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目的:观察全脑缺血再灌注后脑组织内外周蛋白的表达变化,探讨外周蛋白在全脑缺血导致认知功能障碍的发病机制中的作用。  方法:雄性C57BL6小鼠分为两组:假手术组和实验组。通过阻塞小鼠双侧颈总动脉20分钟后再灌注建立全脑缺血模型,应用Morris水迷宫实验检测小鼠的行为学改变,7天后取脑。应用免疫组化和Western blot方法,观察海马、丘脑和大脑皮层的外周蛋白(peripherin)的表达变化。应用免疫荧光双标方法观察外周蛋白和微管相关蛋白-2(MAP-2)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的共表达,明确外周蛋白在中枢神经系统的表达部位。  结果:(1)与正常对照组(25.63±6.89,3.9±1.02)比较,假手术组小鼠潜伏期和穿越平台次数(26.43±3.79,4.95±0.98)无显著变化,手术组逃避潜伏期(48.42±3.89)延长和穿越平台次数(0.89±0.75)减少(P<0.01)。(2)脑缺血再灌注C57BL/6小鼠脑组织内外周蛋白表达明显增多。免疫组化检测发现脑缺血再灌注后外周蛋白在大脑皮层、海马和丘脑均有表达,尤以海马区为著。(3)免疫荧光双标检测表明外周蛋白与MAP-2共表达,然而,外周蛋白与GFAP没有共表达。(4)应用Western blots技术检测表明结果与对照组相比较,脑缺血再灌注小鼠peripherin蛋白相对分子质量(Mr)57000条带表达量皮层区为(0.78±0.08,P<0.01),海马区为(1.09±0.01,P<0.01),丘脑区为(0.81±0.08,P<0.01)。海马区peripherin表达显著增加。Peripherin海马表达增加较皮层与丘脑明显,差异具有统计学意义(P<0.05),皮层与丘脑peripherin表达差异不具有统计学意义。  结论:在BCCAO模型中,小鼠的空间学习和记忆功能受损。全脑缺血导致小鼠脑组织内外周蛋白的表达显著增加,尤其在海马。外周蛋白主要是在神经元表达,而不是在星形胶质细胞内表达。
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