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[目的]通过行为学和形态学指标,研究推拿手法促进坐骨神经损伤(sciatic nerve injury,SNI)大鼠神经功能恢复的疗效,通过降钙素基因相关肽(Calcitonin gene-related peptides,CGRP)在脊髓至外周运动通路中的表达情况分析推拿修复SNI的作用机理。[方法]以SD大鼠作为实验动物,分为正常组、假手术组、模型组、模型对照组和推拿组五组,后三组大鼠通过坐骨神经夹持造成大鼠坐骨神经损伤模型,推拿组大鼠用“按摩推拿手法模拟仪”模拟拨法、点法、揉法进行推拿干预,穴位选取殷门、承山和阳陵泉处,每穴每法各lmin。干预结束后,以斜板试验评价大鼠运动功能的恢复情况；并对脊髓腹角、损伤处神经、腓肠肌的形态学切片进行分析,寻找推拿对损伤神经修复的证据；最后对脊髓腹角-神经损伤点-神经肌肉接头中CGRP的含量进行检测,阐释推拿促进周围神经损伤后再生和修复的机理。[结果]1行为学——推拿能改善SNI大鼠斜板试验角度。斜板试验结果：造模7天后,模型组大鼠的结果显著低于正常组和假手术组,说明坐骨神经损伤模型造模成功。治疗20次后,造模组3组的评分结果均有所提升,其中推拿组上升最多,明显高于模型组和模型对照组(P<0.05)。2形态学——推拿能改善大鼠脊髓腹角、神经和肌肉的微观形态。2.1脊髓HE染色、尼氏体染色、运动神经元尼氏体染色细胞数目结果造模后7天,脊髓HE染色显示正常组、假手术组的神经元排列整齐,形态完整、规则；模型组大鼠的脊髓神经元排列紊乱、数量减少、水肿明显。尼氏体染色示正常组、假手术组运动神经元内尼氏小体染色均匀,蓝染；模型组大鼠则见受损伤的腹角运动神经元肿胀,尼氏小体蓝染变浅且数目减少,甚至溶解或消失。运动神经元尼氏体染色细胞数目显示模型组大鼠被染色细胞数目明显少于正常组和假手术组(P<0.05)。治疗20次后,正常组、假手术组HE染色情况与造模后7天类似。模型对照组的病理变化与模型组类似。推拿组可见神经元排列轻度不规则,并可见轻度胞体肿胀,部分胞核移向细胞边缘,部分神经元可见再生的细胞核。尼氏体染色示正常组、假手术组的尼氏体形态结构与造模后7天后相似；模型组和模型对照组经过自身的恢复,有一定程度的好转,直径减少,肿胀减轻,但仍可见不同程度的尼氏小体溶解,胞质内可见空泡样变性；推拿组则见大多数运动神经元尼氏小体溶解后再生,染色较深且均匀,直径略高于正常组。运动神经元尼氏体染色细胞数目显示模型组大鼠被染色细胞数目仍明显低于正常组和假手术组(P<0.05),推拿组大鼠被染色细胞数目明显高于模型组和模型对照组(P<0.05),但仍低于正常组和假手术组(P<0.05)。2.2 坐骨神经损伤点HE染色、马森三色染色结果造模后7天,正常组、假手术组大鼠神经损伤点HE染色示神经纤维髓鞘及轴索完整；模型组神经纤维紊乱,轴索崩解,雪旺细胞增多。马森三色染色显示正常组、假手术组神经纤维髓鞘排列紧密,雪旺细胞核形态正常,神经膜连续性好；模型组神经纤维散乱轴索崩解,部分变性脱失的髓鞘呈空泡状,雪旺细胞核呈碎片状,神经膜不连续。治疗20次后,正常组、假手术组、模型组及模型对照组神经纤维HE染色与造模7天后无明显区别；推拿组神经纤维排列较整齐,轴索清晰,雪旺细胞形态基本正常。马森三色染色示推拿组神经纤维排列较整齐,髓鞘结构趋于正常,雪旺细胞核基本正常,神经膜连续性恢复较好。2.3 腓肠肌HE染色、肌细胞直径结果造模后7天后,正常组、假手术组肌细胞染色均匀,视野下各细胞直径一致,排列平整,肌细胞间的间隙较小,肌细胞核清晰可见。模型组则见肌细胞染色欠均匀,细胞直径大小不一,多数呈现减少,肌细胞间的间隙增大,细胞分布松散,细胞整体呈现萎缩状态,同时胞核数量增加,欠清晰。肌细胞直径显示,模型组大鼠肌细胞直径明显小于正常组和假手术组(P<0.05)。治疗20次后,正常组、假手术组的肌细胞形态结构与造模后7天时相似；模型组和模型对照组仍见腓肠肌细胞染色不均,同时细胞间隙较7天时有所减小,但有明显的萎缩现象；推拿组则见组织染色均匀,肌细胞直径略低于正常组,细胞间隙略大于正常组,细胞排列较整齐,萎缩现象好转,胞核清晰可见。肌细胞直径示,推拿组大鼠肌细胞直径明显大于模型组及模型对照组(P<0.05),但仍小于正常组和假手术组。3 免疫组化结果——推拿能明显提高脊髓腹角、神经肌肉接头中的CGRP,减少损伤神经点处的CGRP。3.1 脊髓腹角中CGRP表达情况造模后7天,模型组大鼠脊髓腹角CGRP的表达明显高于正常组和假手术组(P<0.05)。治疗20次后,推拿组CGRP明显高于其余4组(P<0.05),模型组和模型对照组大鼠脊髓腹角中的CGRP仍未下降,明显高于同期正常组和假手术组(P<0.05)。3.2 神经损伤点处CGRP表达情况造模后7天,模型组大鼠神经损伤点处CGRP的表达明显高于正常组和假手术组(P<0.05)。治疗20次后,推拿组大鼠神经损伤点处CGRP的表达明显低于模型组和模型对照组(P<0.05),但仍高于正常组和假手术组(P<0.05)。3.3 神经肌肉接头中CGRP表达情况造模后7天,模型组大鼠神经肌肉接头处CGRP的表达明显低于正常组和假手术组(P<0.05)。治疗20次后,推拿组大鼠神经肌肉接头处CGRP的表达明显高于模型组和模型对照组(P<0.05),但仍低于正常组和假手术组(P<0.05)。[结论]1推拿干预可以促进SNI大鼠斜板试验的恢复,提示推拿可以改善SNI大鼠的运动功能。2推拿干预可以减轻脊髓腹角运动神经元肿胀程度,改善尼氏体功能,使神经再生的关键部位——“神经元”得以恢复或减缓其受损程度,促进功能恢复。3推拿干预可以增加脊髓腹角中CGRP的表达,减少神经损伤处CGRP的堆积,进而调节神经肌肉接头的功能,从而改善脊髓至外周运动通路的功能,这是推拿促进神经损伤修复的作用机理之一。