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在女性生殖系统的各种恶性肿瘤中,卵巢癌是最致命的。由于早期无症状,几乎75%的卵巢癌患者在诊断时已处于晚期。手术联合顺铂化疗是卵巢恶性肿瘤的主要治疗方法。然而,经过几个周期的治疗后,患者最终会对顺铂化疗产生耐药性。因此,阐明卵巢癌顺铂耐药的机制,如何逆转顺铂耐药性成为改善患者预后的关键环节。为了阐明卵巢癌细胞耐药的潜在机制,需要建立卵巢癌敏感细胞株和耐药细胞株中蛋白表达模式的差异。既往,许多研究基于mRNA水平对卵巢癌耐药进行了探讨。然而,mRNA水平的变化可能并不总是与蛋白质水平的变化直接相关,翻译和翻译后的改变也可影响肿瘤耐药的发生。蛋白质组学是一种高通量技术,可用于识别在肿瘤发病机制中可能发挥重要作用的差异表达蛋白,这些蛋白质可以作为潜在的药物靶标。G6PD（全称Glucose-6-phosphate dehydrogenase,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶）是磷酸戊糖途径（PPP）的关键酶,可以将NADP+（烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸）还原成NADPH,参与细胞的代谢过程,据既往肿瘤研究结果提示,G6PD可以促进多种肿瘤的恶性进程,但其在卵巢癌耐药中的作用需进一步探究。第一部分人卵巢癌顺铂敏感细胞和顺铂耐药细胞的蛋白质组学分析目的:探讨卵巢癌顺铂敏感细胞A2780和顺铂耐药细胞A2780/CDDP中差异蛋白,寻找可能引起卵巢癌耐药的蛋白靶点。方法:1、采用低浓度加量持续诱导法建立卵巢癌顺铂耐药细胞株A2780/CDDP;2、利用Label-free LC/MS蛋白定量法分析人卵巢癌顺铂敏感细胞A2780和顺铂耐药细胞A2780/CDDP中差异蛋白;3、利用GO功能注释分析和KEGG信号通路分析卵巢癌耐药相关差异表达蛋白的主要功能及相关信号通路;4、蛋白质免疫印迹法（Western blot）和逆转录—聚合酶链反应（RT-PCR）检测A2 780和A2780/CDDP细胞中G6PD的表达量;5、用不同浓度的顺铂处理A2780细胞24h后,Western blot检测细胞中G6PD的表达情况。结果:1、对于蛋白质鉴定,设置显著性阈值以控制错误发生率（FDR）小于1%。在随后的相对定量分析中,对所有比率采用Log2FC＞0.75或＜-0.75倍临界值（p＜0.05）,以减少识别上调蛋白或下调蛋白时产生的假阳性率,共鉴定出197个差异的蛋白,其中95个上调蛋白和102个下调蛋白,且G6PD蛋白的显著性最高;2、生物信息学分析结果显示:上调蛋白（如G6PD,GCLM,STT3B等）和下调蛋白（如MIF,PDHA1等）多数富集在代谢通路;3、蛋白质免疫印迹法和逆转录—聚合酶链反应（RT-PCR）结果均显示G6PD在A2780/CDDP细胞中表达量比在A2780细胞中高（均p＜0.05）;4、Western blot结果显示细胞中G6PD的表达量随着顺铂浓度的增加而上升。结论:卵巢癌耐药的发生可能与代谢通路相关,G6PD蛋白在A2780/CDDP细胞中的表达显著增高,这提示G6PD蛋白可能参与并促进了卵巢癌的耐药进程。第二部分 探讨G6PD在卵巢癌细胞中耐药作用及其潜在的机制目的:基于前期Label-free LC/MS蛋白定量法分析以及来源于生物信息学的分析结果,进一步探讨差异蛋白G6PD在卵巢癌顺铂耐药中的作用及其潜在的机制。方法:1、通过siRNA技术转染A2780/CDDP细胞将细胞分为沉默组（A2780/CDDP-siG6PD）和阴性对照组（A2780/CDDP-NC）,蛋白质免疫印迹法验证G6PD基因的沉默效果;2、MTT法检测细胞对顺铂的敏感性情况;3、流式细胞术检测细胞凋亡情况;4、用顺铂干预细胞24h后,检测A2780、A2780/CDDP、A2780/CDDP-siG6PD、A2780/CDDP-NC细胞中与铁死亡相关的物质活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）、还原型谷胱甘肽（GSH）和脂质过氧化物水平。结果:1、沉默G6PD可增加A2780/CDDP细胞对顺铂的敏感性（p＜0.05）;2、与A2780/CDDP相比,A2780/CDDP-siG6PD细胞凋亡率升高,顺铂诱导的细胞凋亡在 A2780/CDDP-siG6PD 细胞明显高于 A2780/CDDP-NC 细胞（均 p＜0.05）;3、与A2780细胞相比,A2780/CDDP细胞中检测到较低水平的ROS、MDA和脂质过氧化物水平,同时GSH水平较高（均p＜0.05）;沉默G6PD可增加A2780/CDDP细胞中ROS、MDA和脂质过氧化水平,同时降低GSH水平（均p＜0.05）。结论:干扰顺铂耐药细胞A2780/CDDP中G6PD的表达可诱导细胞中的铁死亡水平并增加细胞对顺铂的敏感性。