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野油菜黄单胞菌反枝苋致病变种(黄单胞菌L4)是从反枝苋杂草的根际土壤中分离到的一株具有较强除草活性的新型菌株,已完成的对黄单胞菌L4毒素的分离纯化研究结果表明该菌种的毒素成分由环(苯丙-脯)、胞外多糖和6种有机酸共同组成。细胞水平的作用机理研究表明,黄单胞菌L4毒素的作用靶位是杂草叶片中的线粒体。 在前期研究的基础上,首先通过化学合成得到环(苯丙-脯)单体成分,采用EC50法研究毒素成分中环(苯丙-脯)、胞外多糖和有机酸三者的关系,利用气相色谱法和紫外光谱法构建了从发酵液中直接测定环(苯丙-脯)的方法以及利用硫酸-苯酚法构建了测定发酵液胞外多糖的方法。 然后,我们对发酵培养基进行了优化和对发酵工艺进行了中试研究。摇瓶培养基优化试验表明较合适的发酵培养基为玉米浆7.5 g L-1、蔗糖35 g L-1、硫酸铵15 gL-1、酵母粉O.1 g L-1、硫酸镁2 gL-1、磷酸二氢铵5 g L-1;利用15 L发酵罐进行了发酵动力学研究,确定了发酵的最佳终止时间;利用50 L发酵罐中进行了中试放大和发酵条件正交优化试验,结果表明较合适的发酵条件为搅拌速度300 r min-1、通气量1:1.00 vvm、发酵温度27。C。通过对培养基组分和发酵条件的优化,大大提高了发酵液中环(苯丙-脯)和胞外多糖的含量,从而提高了黄单胞菌L4毒素的活性。 同时,根据黄单胞菌L4毒素和助剂的性质进行了黄单胞菌L4毒素的制剂加工研究,试验结果表明将黄单胞菌L4毒素制成微乳剂效果更为理想。在此基础上进行了黄单胞菌L4毒素微乳剂的田间试验和基本毒理学研究,试验表明黄单胞菌L4毒素微乳剂是一种低毒、环境相容性好的新型生物除草剂,可在狗牙根草坪草中安全使用以防除刺苋、小藜、地锦、辣蓼、车前、马唐、牛筋草等大部分阔叶杂草和部分禾本科杂草。