番石榴叶中酚类物质的研究

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番石榴叶作为治疗腹泻、咳嗽等症的中草药,已经有几百年的应用历史。现代研究表明,正是番石榴叶中的酚类物质赋予它多种药用功效。本论文主要针对番石榴叶中酚类物质的提取工艺、分离鉴定、以及它们的抗氧化和抑菌活性进行了研究。首先探讨了溶剂法和酶法对番石榴叶酚类物质提取率的影响,并对其提取工艺进行了研究。通过单因素实验,确定了丙酮水溶液为较佳的提取溶剂,并发现提取时间、提取温度、溶剂浓度和原料粒度对提取率有较大的影响;通过正交实验和极差分析,确定了丙酮水溶液最佳的工艺参数为:提取温度60℃,提取时间1hr,溶剂浓度为50%,原料粒度为40目,在该工艺条件下得到的总酚含量即没食子酸当量(GAE: gallic acid equivalent)为143 mg GAE/g。另外,探讨了酶法对提取番石榴叶中酚类物质的影响,结果表明纤维素酶、果胶酶、碱性蛋白酶对酚类物质的提取率没有效果;而酸性蛋白酶有助于提高番石榴叶酚类物质的提取率,但提高的效率和幅度有限。其次对番石榴叶中酚类物质进行了分离纯化和鉴定。选用聚酰胺、硅胶、DA201、NKA、NKA-9、D3520和D4020等树脂进行了静态吸附实验。综合考虑它们的吸附率和解吸率,选用DA201进行柱分离。对DA201柱预分离得到的组分,进一步通过聚酰胺柱分离,得到组分A和B。利用RP-HPLC分析这两个组分,并将结果与标准品的液相色谱信息比较,发现样品中至少有7种酚类物质:没食子酸、原儿茶酸、阿魏酸、山奈素、咖啡酸、绿原酸、槲皮素等。接着又通过HPLC-ESIMS进行分析。根据液相色谱和质谱信息,证实样品中含有槲皮素、山奈素、金丝桃甙、异槲皮酮、番石榴苷和山奈素甙。其中还发现有三种未见文献报道的物质存在于番石榴叶提取物中,其具体结构有待鉴定。最后,利用DPPH自由基比色法测定了番石榴叶提取物的抗氧化活性。通过测定提取物的自由基清除率和EC50,发现番石榴叶提取物具有抗氧化活性,其中的粗丙酮提取物有更佳的抗氧化性。另外还用滤纸片扩散法对番石榴叶提取物抗菌活性进行了研究,结果发现提取物对沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等致病菌有较强的抑制作用。
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