桃花黄酮提取纯化、稳定性与抗氧化性研究及其结构鉴定

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桃花是一种资源丰富的药食同源植物,具有美容,通便之功效,含有多种生理活性成分,黄酮就是其中的重要组分之一。本试验以桃花为原料,对桃花黄酮的提取、纯化工艺及其稳定性、抗氧化活性进行了研究,并对桃花黄酮的结构进行了初步鉴定。试验结果如下:1、通过研究不同因素对桃花黄酮提取工艺的影响,确定了桃花黄酮最佳提取工艺条件为提取温度50℃、乙醇浓度70%,料液比1:20,提取时间90 min。优化条件下桃花黄酮得率为4.66%,提取级数为二级,两次提取后提取得率可达5.62%。2、从D101、HPD722、DM130、LK17、HPD100和聚酰胺六种树脂中,确定聚酰胺为最佳纯化树脂。静态条件下,聚酰胺吸附平衡时间为30 min,解吸平衡时间为40 min,吸附和解吸都比较快,吸附最佳温度为20°C,解吸最佳温度为30°C。动态纯化最佳条件为:上样浓度为3.6451 mg/mL.,上样流速为1.5 mL/min,洗脱剂流速为1.0 mL/min,乙醇的浓度为70%。此条件下纯化三次后,黄酮纯度提高到44.8%。3、对桃花稳定性研究可得,光照对桃花黄酮稳定性有一定影响;温度在70°C以下相对稳定,高温对其影响很大;pH在3-10范围内都是比较稳定的,酸性过强不利于它的稳定;桃花黄酮极易被氧化剂H2O2氧化;在Zn2+、Cu2+、Cr3+金属离子溶液中不够稳定;酒石酸、柠檬酸、葡萄糖、蔗糖对其稳定性几乎没有影响。抗氧化活性研究结果表明,在浓度为25μg/mL-250μg/mL范围内,纯化后黄酮具有较强的抗氧化活性,且纯化后桃花黄酮抗氧化活性相比纯化前明显增强。其中,相同浓度时纯化后黄酮还原力较Vc稍弱,但高于纯化前黄酮;纯化后黄酮对DPPH的IC50为13.468μg/mL;对ABTS自由基的IC50为52.160μg/mL;对羟基自由基的IC50为196.975μg/mL。4、采用HPLC-MS技术对纯化的桃花黄酮进行定性分析,初步的鉴定出桃花黄酮中含有以下物质:山柰酚-3-O-葡萄糖苷或山柰酚-7-O-葡萄糖苷、山奈素-3-O-云香糖苷、山柰酚、槲皮素-3-木糖苷、柚皮素。硅胶柱层析进一步分离后得到的单体结构鉴定为柚皮素。
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