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本论文将对此进行深入研究。
第1章BMP-2诱导MEFs成软骨分化
目的：1.建立BMP-2诱导MEFs软骨分化的模型；2.建立软骨分化的检测评估方法。
方法:
1.将传至5-6代的MEFs，以107／ml密度重悬，取10 μl滴入24孔板的单孔中进行培养，待细胞完全贴壁后，加入500 μl含不同浓度BMP-2的新鲜的完全培养基继续培养，培养结束时进行检测。
2.采用Alcian Blue染色检测软骨分化程度，Westem Blot检测II型胶原的表达水平。
结果:
1.BMP-2能够明显促进MEFs的成软骨分化，且呈剂量依赖关系，200 ng／ml时的作用最为显著。
2.BMP-2诱导3d即检测到软骨分化，随后5d-10d范围内，分化更加显著，具有明显时间依赖关系。
3.BMP-2上调Col2al的蛋白表达水平，并呈时间依赖关系。
结论:
1.成功建立BMP-2诱导MEFs软骨分化的细胞模型；
2.Alcian Blue染色能够有效评估软骨分化水平。
第2章Sox9在软骨分化中的作用目的1.探讨BMP-2对Sox9的调控方式；
2.明确Sox9在BMP-2诱导的软骨分化中的作用。
方法:
1.采用半定量RT-PCR检测BMP-2对Sox9转录水平的调控；
2.采用Western Blot检测BMP-2对Sox9翻译水平的调控；
3.使用Luciferase报告系统检测BMP-2对Sox9转录活性的影响；
4.siRNA干扰MEFs中Sox9的表达，Alcian Blue染色检测BMP-2诱导MEFs的软骨分化状况；
5.用腺病毒过表达Sox9，Alcian Blue染色检测BMP-2诱导MEFs的软骨分化状况。
结论:
1.在软骨分化过程中，BMP-2上调Sox9的表达并增强其转录活性；
2.Sox9是BMP-2诱导MEFs软骨分化的必要因素。
第3章BMP信号通路对Sox9的调控目的1.明确BMP／Smad信号通路是否参与Sox9表达与转录活性的调控；
2.明确BMP／p38信号通路是否参与Sox9表达与转录活性的调控。
方法:
1.用重组腺病毒过表达Smad6封闭BMP／Smad途径后，半定量RT-PCR检测BMP-2对Sox9转录水平的影响，Luciferase报告系统检测对Sox9转录活性的影响；
2.用p38抑制剂封闭BMP／p38途径后，半定量RT-PCR检测BMP-2对Sox9转录水平的影响，Luciferase报告系统检测BMP-2对Sox9转录活性的影响；
结论:
1.BMP／Smad介导BMP-2诱导的Sox9转录活性的上调；
2.BMP／p38介导BMP-2诱导的Sox9表达水平与转录活性的上调。
第4章BMP-2调控Sox9启动子的活性目的1.对Sox9核心启动子区域进行定位；
2.研究BMP-2调控Sox9启动子活性及其分子机制。
方法:
1.采用系列缺失突变结合Luciferase报告系统检测Sox9的核心启动子区域，以及BMP-2调控Sox9启动子活性的位点；
2.采用EMSA(Electrophoretic Mobility Shift Assay)技术检测启动子片段与转录因子在细胞外的结合， Supershift assay检测结合转录因子特异性；
3.使用染色质免疫共沉淀(Chromosome Immunoprecipitation，CHIP)技术检测转录因子与启动子在细胞核内的结合。
结论:
1.Sox9核心启动子定位在-67／-45区域内的CCAAT box，与转录因子NF-Y有关；
2.BMP-2通过增加转录因子NF-Y与CCAAT box的结合，激活Sox9启动子的活性，而这一过程由BMP／p38途径所介导。