即刻种植骨愈合区降钙素基因相关肽表达的研究

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【目的】通过大鼠拔牙后即刻种植体洞型的骨损伤模型,利用组织学和免疫组织化学的方法,结合统计学分析,观察即刻种植窝预备区域早期骨愈合过程中降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide, CGRP)的表达特点。探讨降钙素基因相关肽在牙槽骨愈合和改建时的表达规律,为把降钙素基因相关肽引入到牙槽外科和口腔种植基础及临床医学研究中进行初步探索。【方法】16只Wistar成年雄性大鼠随机分到4个组中,每组4只,所有动物在同一天制备即刻种植窝预备牙槽骨损伤模型,1至4组依次分别在模型制备后4、7、14、21天取标本。即刻种植窝预备牙槽骨损伤模型制备:大鼠称重后以0.4%戊巴比妥钠(1ml/100g)通过腹腔注射麻醉大鼠,麻醉成功后用橡皮套将大鼠四肢及上颌下颌固定在实验手术台上,用普通镊子由助手协助显露上颌第一磨牙区域,手术区常规消毒、铺巾,在无菌的条件下用小尖头探针分离牙龈,用牙镊拔出左上颌第一磨牙然后用小螺纹钻预备深度和直径合适的种植体窝,术后用消毒小棉球压迫止血。种植窝制备后满4、7、14、21天后在模型制备区域取一小段牙槽骨组织块,所有标本经10%甲醛溶液固定24小时后取出,中性EDTA脱钙液脱钙,然后脱蜡、包埋,切片,免疫组织化学染色、HE染色(观察骨愈合区组织形态),最后光镜下免疫阳性细胞计数,采集图像,应用Image-Pro plus 6.0图像分析系统测量累积光密度值,统计学分析。【结果】1.模型制备成功:16只动物在试验期间种植洞形制备顺利,术区周围组织未见明显肿胀感染现象。2.HE观察结果显示,4天、7天时,骨损伤修复区纤维性组织较多;整个骨损伤修复区域细胞的增殖在4天,7天时最为活跃,细胞核染色较深,14天,21天时,细胞核小、染色相对较浅;四个时期在骨修复区边缘均可见到前成骨样细胞及破骨细胞,中心区域未曾发现。3.骨组织免疫组织化学染色显示,CGRP免疫组织化学染色阳性的细胞,胞浆着色;CGRP在成熟的骨细胞中未见着色,在骨修复区边缘的类成骨细样细胞着色;在模型建立后第7天取标本组CGRP主要在骨修复改建中心区的成纤维细胞中着色,与其它不同时间段种植区骨愈合组织相比,此期CGRP在骨修复改建中心区域染色阳性细胞数最多,染色强度最强,4组经秩和检验CGRP阳性细胞数和IOD值均是在第七天时最高,具有统计学意义(P<0.01)。【结论】1. CGRP在即刻种植术骨愈合区域存在高表达现象,该现象发生在成骨样细胞高增殖状态(骨细胞形成的关键时期)。CGRP在正常的牙槽骨及颌骨未见明显表达,从相反角度证明了,只有在骨修复改建期细胞功能活跃时CGRP才呈现阳性表达。推测CGRP可能是促进骨愈合和抑制骨吸收的一个重要因子。2. CGRP主要在纤维性骨痂向骨性骨痂过度时呈高峰态表达,而CGRP的表达高峰期也是成纤维细胞被诱导表达其成骨作用的关键时期,提示CGRP有可能是诱导成纤维细胞表达其成骨作用的一个重要因子。3.CGRP主要在前成骨细胞和被诱导表达成骨作用的成纤维细胞胞质中染色呈强阳性,考虑CGRP的表达可能是前成骨细胞形成和增殖活动活跃的一个标志,也可能是成纤维细胞被诱导开始表达成骨作用的一个标志。
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