在甾体医药工业中,微生物催化的3-酮基甾体-1(2)脱氢反应十分重要,是制备高抗炎活性肾上腺皮质激素的关键反应,可使甾体药物的抗炎活性成倍增加。　　 本课题从工业用菌简单节杆菌(Arthrobacter simplex)以及具有高活性3-酮基甾体-1(2)脱氢活性的一株分枝杆菌(Mycobacterium sp.)中获得了起3-酮基甾体-1(2)脱氢作用的C1,2位脱氢酶(KSDD),并在大肠杆菌进行了克隆表达,对两者的酶活进行了初步的比较。　　 首先,根据NCBI中的Arthrobacter simplex碱基序列设计引物,获得了分枝杆菌KSDD基因全序列,与NCBI中报道的序列一致。　　 其次,分析已知分枝杆菌的KSDD碱基序列,设计简并引物,以本实验室筛选的一株分枝杆菌基因组DNA作模板,得到一个1500bp的KSDD基因片段,通过染色体走读的方法,得到其完整的阅读框。分析表明,该基因包含开放性阅读框1701bp,编码567个氨基酸,与Mycobacterium smegmatis str.MC2155(Genbank CP000480)的KSDD基因部分同源性达到82％。　　 首先由pET22构建pTQ004与pTQ005作为表达载体,在E.coliBL21(DE3)/plysS中分别对两个KSDD进行了异源表达。转化子经IPTG诱导,SDS-PAGE结果表明表达出蛋白为包涵体,酶活在误差限左右。　　 随后,由带有弱启动子的pUC18构建了pT0002与pTQ003作为表达载体,在E.coliDH5α中分别对两个KSDD进行了异源表达。转化子经IPTG诱导,在30℃的水浴中测定酶活,Arthrobacter simplex的KSDD酶活为0.82±0.09 U,Mycobacterium sp.的KSDD酶活为0.37±O.05U。pUC18为弱启动子,表达量很少,在蛋白电泳中看不到条带。