柞蚕moricin-2基因的克隆及重组表达

来源 :大连理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zoufan20007
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所有动物都有自身的防御机能,可以抵抗细菌、真菌、病毒及癌细胞等入侵。脊椎动物可以通过“免疫记忆”获得免疫力,而无脊椎动物则缺乏这种免疫系统,但它们具有先天免疫力,特别是昆虫类,有很强的先天免疫力,当其受到细菌感染或创伤感染时,会在脂肪体和血细胞中很快诱导产生抗菌肽,这些抗菌肽具有热稳定性好,抗菌谱广的特点。抗菌肽不仅能抑制细菌生长,某些抗菌肽对部分真菌、原虫、病毒及癌细胞等均具有强有力的杀伤作用,甚至有一定的免疫调节功能,能加速伤口愈合,且不会产生耐药性。论文通过注射大肠杆菌诱导榨蚕滞育蛹,提取脂肪体mRNA,根据已经得到的测序正确的柞蚕moricin-2的部分基因片段,RACE克隆moricin-2的5’,3’端基因,拼接柞蚕moricin-2全基因序列。反转录合成cDNA,根据拼接的柞蚕moricin-2全基因序列CDS,设计引物,并加入BamH Ⅰ和HindⅢ酶切位点,PCR扩增获得榨蚕的moricin-2基因片段,克隆到PCR2.1vector载体进行序列测定获得了柞蚕moricin-2基因编码序列207bp。moricin-2多肽由68个氨基酸组成,N-端23个氨基酸为信号肽;与家蚕moricin-2的CDS同源性为53%。以pET28a(+)为表达载体,构建原核融合表达质粒,重组蛋白由104个氨基酸组成,带有His标签,重组质粒pET28a (+)-moricin-2转化E. coli BL21(DE3),采用IPTG诱导进行表达,离心收集细胞,经SDS-PAGE电泳检测,目的蛋白大小在10kD左右,与理论值相符,并且,目的蛋白质以包涵体形式存在。
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