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人CD4分子为55kD的单链跨膜糖蛋白，由458个氨基酸残基组成，包括信号肽23个氨基酸残基、胞膜外区374个氨基酸残基、跨膜区21个氨基酸残基和胞浆区40个氨基酸残基，其在T细胞的活化及信号转导过程中起重要作用。许多疾病的发生发展都与CD4分子有着紧密的联系，如自身免疫病、移植排斥反应以及人类免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus，HIV）和人类疱疹病毒7型（Human Herpes Virus，HHV—7）的感染等。因此，针对CD4靶位的单抗在许多疾病的治疗中具有极大的潜力，如T细胞淋巴瘤、HIV感染、自身免疫病以及器官移植排斥反应等。
本研究对本所自主研制的抗人CD4鼠单抗（WuT4）进行人鼠嵌合抗体改造作了初步探讨。从健康成人（本人）外周血单核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）中钓取人IgG1κ恒定区基因，经nucleotide blast（Blastn）核酸序列比对分析表明，所获得的重链恒定区基因（hCH）为990bp（带终止密码子），编码329个氨基酸残基，为IgG1亚类，同源性为99%；轻链恒定区基因（hCL）为321bp（带终止密码子），编码106个氨基酸残基，为Kappa型，同源性为100%。分别从质粒pAG4622—CD4VL和pAH4604—CD4VH中获取带有Kozak序列和信号肽序列的WuT4轻链可变区基因（mVL）和重链可变区基因（mVH），利用信号肽分析软件对信号肽剪切位点进行了预测分析，分析结果表明，所获得的鼠单抗重链可变区编码111个氨基酸残基，鼠单抗轻链可变区编码98个氨基酸残基。然后利用重叠延伸PCR（Gene Splicing by Overlap Extension PCR，SOE—PCR）法分别将人抗体恒定区基因和鼠抗体可变区基因进行拼接，并分别与真核表达载体pcDNA3．3—TOPO和pOptiVEC—TOPO进行连接。琼脂糖凝胶电泳鉴定、PCR鉴定以及测序分析表明成功构建了抗人CD4人鼠嵌合抗体真核表达载体pcDNA3．3—H和pOptiVEC—L以及pOptiVEC—H和pcDNA3．3—L。嵌合重链由440个氨基酸残基组成，嵌合轻链由204个氨基酸残基组成，人源化程度为67．5%。将构建的抗人CD4嵌合抗体真核表达载体在大肠杆菌中进行扩增并制备转染用的高质量质粒DNA。然后采用脂质体法分别瞬时共转染CHO—S细胞。以RT—PCR和DNA测序比对分析鉴定了嵌合抗体基因在CHO—S细胞中成功进行了转录；以间接ELISA法和直接IFA法鉴定了嵌合抗体在翻译水平的表达。瞬时表达结果分析表明，构建的抗人CD4嵌合抗体真核表达载体能够在真核细胞CHO—S中进行表达。本研究为其在真核细胞中实现稳定表达打下了一定的基础。