【摘 要】
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冷诱导RNA结合蛋白（Cold inducible RNA-binding protein, CIRP）是哺乳动物中第一种被发现的冷休克蛋白,由172个氨基酸构成,分子量为18 KD,具有RNA结合域,能被低温大量诱导表达,在冷诱导的细胞生长抑制中起着重要作用。CIRP可能参与人和动物的神经发育与调节、胚胎发育、肿瘤发生以及动物冬眠等生理学过程;同时新近研究发现,CIRP能够抑制由TNF-α诱导的
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冷诱导RNA结合蛋白（Cold inducible RNA-binding protein, CIRP）是哺乳动物中第一种被发现的冷休克蛋白,由172个氨基酸构成,分子量为18 KD,具有RNA结合域,能被低温大量诱导表达,在冷诱导的细胞生长抑制中起着重要作用。CIRP可能参与人和动物的神经发育与调节、胚胎发育、肿瘤发生以及动物冬眠等生理学过程;同时新近研究发现,CIRP能够抑制由TNF-α诱导的细胞凋亡过程。因此,CIRP是发挥广泛生物学作用的多功能蛋白,开展深入研究并揭示其作用机制进对开发其潜在的应用价值具有重要意义。本研究从冷处理后的BALB/C小鼠睾丸组织中提取总RNA,通过反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）扩增CIRP的cDNA,构建重组克隆质粒pGEM-T-CIRP,经PCR、酶切鉴定正确后,送测序公司测序,序列分析结果表明BALB/C鼠CIRP的cDNA被正确克隆;将克隆的cDNA分别连入真核表达载体pcDNA3和pECFP-C1,然后转化至E.coli DH5α感受态细胞内,通过酶切鉴定筛选出阳性重组菌;利用脂质体法将2种重组质粒pcDNA3-CIRP和pECFP-C1-CIRP以及空白对照质粒分别转染NIH3T3细胞, 36h后荧光倒置显微镜及RT-PCR方法观察及鉴定CIRP在细胞中的表达情况,结果表明重组表达质粒构建正确并获得了表达;同时对pECFP-C1-CIRP转染组进行G418加压筛选,荧光显微镜观察所有细胞均呈现较强绿色荧光,表明成功筛选获得稳定表达的细胞株,而绿色荧光主要分布于细胞质和细胞外,说明随着加压筛选CIRP融合蛋白被分泌出细胞外;最后将转染后的细胞于4℃、14℃、24℃条件下进行冷诱导凋亡实验,经Hoechst33258荧光染色法后,细胞凋亡荧光显微镜检测结果表明转染CIRP基因的细胞组凋亡程度小于对照组,在保护细胞免受冷凋亡过程中具有重要作用。本研究建立了细胞冷凋亡实验模型,证实了CIRP在抗细胞凋亡过程中扮演积极的角色,为深入开展CIRP的功能性研究和作用机制奠定了基础。
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冷诱导RNA结合蛋白（Cold inducible RNA-binding Protein,CIRP）是Nishiyam H（1997）等从冷处理的BALB/3T3鼠成纤维细胞中分离和鉴定出的第一种哺乳动物冷休克蛋白，并发现降低温度可以使这种蛋白的表达升高，而升高温度则使其表达水平下降。近年来人们发现不论是在冷应激等各种应激条件下还是在低温治疗过程中CIRP都发挥着保护机体的积极作用。我们认为CI
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冷诱导RNA结合蛋白（Cold inducible RNA-binding protein,CIRP）是在哺乳动物细胞中被发现的第一种冷应激或冷休克蛋白,伴随着冷应激过程过量表达。这一发现拉开了研究CIRP及其生物学功能的序幕。目前,科学家们已经证实CIRP不仅具有介导冷诱导的细胞生长抑制作用,而且可能参与人和动物的生殖发育、神经发育与调节、胚胎发育、肿瘤发生以及动物冬眠等生理学过程。因此,建立科
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