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大肠杆菌(E.coli)是引起奶牛发生乳腺炎的主要病原菌之一,奶牛感染该菌发生乳腺炎最终会发展为乳腺纤维化。奶牛乳腺成纤维细胞(BMFBs)是乳腺组织的主要间质细胞,当乳腺组织受到损伤时,成纤维细胞会转变为肌成纤维母细胞,分泌大量的细胞外基质(ECM),其过多沉积或降解受阻会导致纤维化。本研究的主要目的是想探讨E.coli对体外培养的BMFBs瘦素(LP)、瘦素受体(OB-Rb)及ECM表达的变化,以明确E.coli引起奶牛乳腺纤维化过程中LP/OB-Rb与纤维化之间的联系。本实验采用(105CFU/mL、106CFU/mL、108CFU/mL)热灭活的E.coli 作用于体外培养的BMFBs于不同的时间点(6 h、12 h、24 h、48 h、72 h),采用qPCR和Western-blot方法检测LP/OB-Rb、Ⅰ型胶原蛋白(COLIα1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA及蛋白的表达;采用ELISA方法检测透明质酸(HA)的表达情况,分别对其mRNA和蛋白表达水平进行相关性分析。结果表明:(1)不同浓度热灭活的E.coli作用BMFBs不同时间后,LP/OB-Rb mRNA和蛋白的表达不同程度的升高。在12h、24h 106CFU/mLLP mRNA处理组极显著高于对照组(P<0.01),72h达到峰值(P<0.01);108CFU/mL处理组在72h OB-Rb mRNA的表达最高,108CFU/mL在48 h处理组蛋白的表达最高。(2)不同浓度热灭活的E.coli作用于BMFBs,α-SMA和COLIα1 mRNA及蛋白的表达均出现不同程度的上升。除48 h外其余作用时间106CFU/mL、108CFU/mL处理组α-SMA mRNA的表达与对照组相比极显著升高(P<0.01),在12 h 108 CFU/mL 处理组 α-SMA mRNA 表达最高(P<0.01),106 CFU/mL 处理组 α-SMA 蛋白的表达在48 h最高;COLIαⅠ mRNA的表达在12 h、48 h降低,72 h出现升高,且6h106CFU/mL浓度组表达最高,106CFU/mL及108CFU/mL处理组蛋白的表达在12h、48h、72h极显著高于对照组(P<0.01)。(3)不同浓度热灭活的E.coli作用BMFB后,细胞培养上清液中HA的表达均高于对照组,除48 h外其他时间点106 CFU/mL处理组极显著高于对照组(P<0.01),在12h达到最高(P<0.01)。(4)相关性分析结果显示:LP/OB-Rb mRNA相关性分析显示两因子在12 h显著相关(P<0.05),蛋白水平相关性分析显示两因子于48h极显著相关(P<0.01);LP与COLIα1 mRNA在6h显著相关(P<0.05),蛋白在24h、48h极显著相关(P<0.01);LP 与 α-SMA mRNA 在 12 h、72 h 相关性极显著(P<0.01);OB-Rb 与 COLIα1 mRNA在24 h、72 h小时极显著相关(P<0.01),蛋白在6 h时有显著的相关性(P<0.05)。OB-Rb 与 α-SMA mRNA 在 6h 相关性显著(P<0.05),在 12h、48h 相关性极显著(P<0.01),OB-Rb与α-SMA蛋白在72h相关性极显著(P<0.01)。在12 h、24h LP与HA显著相关(P<0.05)。综上所述,热灭活的E.coli能够促进体外培养的BMFB LP/OB-Rb和细胞外基质(α-SMA、COLIα1 和 HA)的表达,并且 LP/OB-Rb 的表达与 α-SMA、COLIα1和HA的表达具有相关性。提示LP在E.coli致奶牛乳腺纤维化中有一定的促进作用。