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[目 的]膀胱癌（bladdercancer,BC）是全球最常见的恶性泌尿系统肿瘤,具有较高的发病率和死亡率,且呈现年轻化趋势。尿路上皮细胞癌占膀胱癌的90%以上,根据是否侵犯肌层分为非肌层浸润性膀胱癌（non-muscle-invasive bladder cancer,NMIBC）和肌层浸润性膀胱癌（muscle-invasive bladder cancer,MIBC）。NMIBC可以行经尿道膀胱肿瘤切除术治疗保留膀胱,术后辅以化疗和/或免疫治疗。值得注意的是,大约有50%～70%的NMIBC会复发,最终会有10%～20%的NMIBC进展为MIBC或者发生远处转移。MIBC或者恶性程度较高的膀胱癌主要采用根治性膀胱切除术为主的综合治疗,术后近期和远期并发症较多,给患者带来了极大的痛苦。由此可见,膀胱癌的早期诊断和治疗对提高患者的生活质量和改善患者的预后具有重要的临床价值。长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）是指长度大于200bp的非编码RNA,最初因不具备编码蛋白质功能,被认为是“转录噪音”遭到忽视。然而,基因组学技术的快速发展使人们认识到lncRNA与各种肿瘤的恶性表型关系密切,异常表达lncRNA与癌症相关死亡率的增加密切相关。近年来,越来越多的证据表明,lncRNA可以通过参与调控转录、基因表达和mRNA表达等方面影响基因的表达和肿瘤的生物学功能,在膀胱癌的发生和进展方面发挥了重要的作用。HAGLROS是一个长度为699 bp,位于染色体2q31.1上的lncRNA。大量的研究表明,HAGLROS与肿瘤细胞的增殖、侵袭、凋亡、自噬和能量代谢重排关系密切,在多种肿瘤中发挥促癌作用。然而,HAGLROS在膀胱癌生物学功能和作用机制目前尚不清楚。本课题旨在:1、探索HAGLROS在膀胱癌中的表达水平和临床意义;2、明确HAGLROS在膀胱癌中的生物学作用;3、探究HAGLROS在膀胱癌中的分子调控机制;4、为膀胱癌的诊断、发病机制研究和分子靶向治疗提供新的方向。[方 法]在第一部分,首先通过lnCAR数据库预测HAGLROS的二级结构,并评估其蛋白质编码潜能和保守性。其次,利用GEPIA数据库、Lnc2Cancer数据库、starBase数据库、TCGA数据库和我们的转录测序数据分析HAGLROS在膀胱癌中的表达水平以及与预后的关系。此外,通过实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR,qRT-PCR）和原位杂交（in situ hybridization,ISH）实验检测HAGLROS在膀胱癌组织和细胞中的表达水平。在第二部分,首先构建了 HAGLROS慢病毒过表达和干扰载体。然后,利用细胞转染技术培养过表达和沉默HAGLROS膀胱癌稳定转染细胞株,并通过荧光显微镜观察转染效率,利用qRT-PCR实验检测表达效率。其次,通过CCK-8实验、细胞划痕损伤修复实验、Transwell实验和流式细胞技术分别探究HAGLROS对膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭和细胞周期的影响。最后,通过建立裸鼠皮下成瘤模型和免疫荧光染色实验研究HAGLROS在体内对膀胱癌生长的作用。在第三部分,首先利用核质分离实验、荧光原位杂交（fluorescent in situ hybridization,FISH）实验探究HAGLROS在膀胱癌细胞中的亚细胞定位。其次,利用 TCGA数据库、starBase数据库、lncBase数据库和转录数据预测HAGLROS的下游靶基因。随后,通过qRT-PCR实验、Western blot实验和免疫组织化学染色（immunohistochemistry,IHC）实验检测HAGLROS下游靶基因在膀胱癌中的表达水平。此外,通过FISH共定位实验和双荧光素酶报告实验进一步验证HAGLROS与其下游靶基因间的相互结合关系。再次,运用qRT-PCR和Western blot实验研究HAGLROS与其下游靶基因间的调控作用关系。最后,通过细胞功能挽救实验研究HAGLROS下游靶基因对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。[结 果]在第一部分,通过分析lnCAR数据库发现,HAGLROS有2种二级结构,并且这2个转录本都不具备蛋白质编码能力,具有较强的保守性。公共数据库和转录测序数据分析结果显示,HAGLROS在膀胱癌中显著高表达。此外,qRT-PCR和ISH实验结果同样证明,HAGLROS在膀胱癌组织和细胞中显著高表达,并且高表达的HAGLROS与较高的病理组织学分级和较晚的临床分期相关,对膀胱癌的诊断具有重要的价值。在第二部分,我们成功构建了 HAGLROS慢病毒过表达和干扰载体,并培养和筛选了过表达和沉默HAGLROS膀胱癌稳定转染细胞株。细胞功能学实验表明:过表达HAGLROS能够促进膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭,缩短G1期;下调HAGLROS可以抑制膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭,使细胞停滞在G1期。此外,动物实验结果表明,过表达HAGLROS在体内同样能够促进膀胱癌的生长。在第三部分,核质分离实验和FISH实验结果表明,HAGLROS主要分布于膀胱癌细胞的细胞质中。公共数据库和转录测序数据分析结果显示:SPRR1B在膀胱癌中显著高表达;miR-330-5p与HAGLROS和SPRR1B存在共享的结合位点。双荧光素酶报告实验结果证明,HAGLROS和SPRR1B与miR-330-5p存在直接的结合位点和竞争性结合关系。Western blot、qRT-PCR和IHC结果证实了在膀胱癌组织和细胞中SPRR1B显著高表达,miR-330-5p明显低表达。此外,HAGLROS能够正向调控SPRR1B表达,负向调控miR-330-5p表达,miR-330-5p能够负向调控SPRR1B表达。值得注意的是,挽救性实验表明:降低的miR-330-5p能够逆转沉默HAGLROS对膀胱癌细胞恶性表型的抑制作用;沉默SPRR1B能够逆转下调的miR-330-5p对膀胱癌细胞恶性表型的促进作用,进而抑制HAGLROS的促癌作用。[结 论]HAGLROS在膀胱癌组织和细胞中显著高表达,并且高表达HAGLROS与较高的病理组织学分级和较晚的临床分期相关,对膀胱癌的诊断具有重要的价值;HAGLROS能够促进膀胱癌的增殖、迁移和侵袭,影响膀胱癌的细胞周期;HAGLROS可以通过海绵吸附miR-330-5p正向调控SPRR1B的表达,促进膀胱癌的恶性表型。