牛MRVI1基因遗传多态性及对脂代谢的影响研究

来源 :广东海洋大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jackydmb
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鼠逆转录病毒整合位点1同系物(murine retrovirus integration site 1 homolog,MRVI1)基因是在小鼠中发现的一种肿瘤抑制基因。该基因已经发现了几种编码不同蛋白的可变剪接的转录物,这些转录本具有不同的翻译起始位点,包括非AUG(CUG)起始位点等[1]。MRVI1基因编码的蛋白质存在于内质网膜中,可作为c GMP依赖性激酶-1(protein kinase c GMP-dependent 1,PKG1)的底物,通过调节IP3诱导钙的释放发挥生物学作用。有研究表明,MRVI1基因的MRV整合通过改变对骨髓细胞生长和/或分化关键基因的表达诱导小鼠中的髓样白血病,因此该基因可以作为髓样白血病肿瘤抑制关键基因而发挥重要作用。MRVI1基因是在本课题组前期转录组学分析的基础上,筛选出的与牛肉质性状相关的候选基因。本研究拟以该基因为研究对象,通过该基因的SNPs位点筛查以及关联分析,以及在细胞水平研究其与脂肪代谢的关系;探讨MRVI1基因对脂代谢产生的影响和调控机制,以期为改善肉品质性状提供新的基因资源。本研究以中国西门塔尔牛为研究对象,测定了135头中国西门塔尔牛的肉质和胴体性状,采用直接测序的方法进行MRVI1基因的遗传多态性分析,深入研究MRVI1基因与肉牛肉质及胴体性状的相关关系以及进一步探讨MRVI1基因是否具有可用于未来牛肉质及胴体性状标记辅助选择的分子标记。研究结果表明,在牛MRVI1基因的启动子序列中筛查到八个SNP位点g.41970426A>G、g.41970520T>C、g.41970609A>G、g.41970626G>A、g.41970714A>G、g.41971686G>A、g.41971818G>A、g.41972009A>C。与中国西门塔尔肉牛的胴体性状和肉质性状的相关性分析结果表明,g.41970426A>G、g.41970520T>C、g.41970609A>G、g.41970714A>G和g.41971818G>A位点与肾脏脂肪和脂肪覆盖率显著相关(P<0.05);g.41970626G>A位点与屠宰率、肾脏脂肪和胴体长显著相关(P<0.05);g.41971686G>A位点与脂肪覆盖率和眼肌面积显著相关(P<0.05);g.41970426A>G、g.41970520T>C、g.41970609A>G、g.41970626G>A、g.41970714A>G、g.41971818G>A和g.41972009A>C位点均可作为相关肾周脂肪性状的分子标记(P<0.01)。结果表明MRVI1基因启动子区域的SNPs与中国西门塔尔牛胴体和肉质性状具有相关关系,可能对脂代谢具有重要的调控作用。在此基础上,为深入探究MRVI1基因对脂肪合成代谢的作用和调控机制,本研究构建MRVI1基因过表达载体MRVI1-p BI-CMV3和干扰载体pb7SK-MRVI1-sh RNA,在牛前体脂肪细胞中检测其对细胞内甘油三酯、胆固醇和游离脂肪酸含量的影响,旨在揭示MRVI1基因在细胞水平上对脂代谢通路中甘油三酯、胆固醇和游离脂肪酸合成的作用。结果表明,干扰MRVI1基因后,牛前体脂肪细胞的MRVI1基因m RNA水平上的表达量显著低于对照组的表达量(P<0.05);而过表达MRVI1基因后,能在牛前体脂肪细胞中高效表达,显著高于对照组的表达量(P<0.05);MRVI1基因在细胞中过表达和沉默都有显著升高细胞中甘油三酯和胆固醇的含量的趋势,并且都显著降低了游离脂肪酸的含量。综上所述,前体脂肪细胞中MRVI1基因启动子区域存在的g.41970426A>G、g.41970520T>C、g.41970609A>G、g.41970626G>A、g.41970714A>G、g.41971686G>A、g.41971818G>A、g.41972009A>C与中国西门塔尔肉牛胴体和肉质性状存在显著相关性;同时MRVI1基因对牛前体脂肪细胞内甘油三酯、胆固醇和游离脂肪酸的调控作用仍需要进一步的深入探索。本研究结果可为深入研究MRVI1基因的相关生物学功能及应用于肉牛分子辅助选择和良种选育提供理论依据,并为肉牛肉质性状分子育种提供新的基因资源。
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